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ninxia1

禁虫 (著名写手)

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biosci

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2楼2016-12-15 12:34:12
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蓝索道人

木虫 (正式写手)

两种方法都可以,如果你选的物种的SOD基因分段不是很多长度也都不是很短,比如两段,分别PCR再连接就可以了,如果分段比较多,那还是提RNA吧

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努力就有收获!
3楼2016-12-15 18:08:45
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ken19860823

木虫 (正式写手)

克隆sod1的cdna到该菌种的表达载体,然后导入。rna一是只能瞬时表达,另外还可能被免疫掉。单细胞的过表达很成熟的,真核原核都可以买到克隆和穿梭载体。病毒的基因组有rna的,恕我愚钝没见过细胞生物是rna遗传的

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做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-12-16 16:39:45
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jmzLdmx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ninxia1: 金币+10, 有帮助, 谢谢 2016-12-29 00:20:29
这个首先在Gene Bank上找到你这个菌SOD的序列,然后再找到这个菌的全基因组序列,根据目的片段序列设计引物,然后再用PCR进行扩增目的片段,然后导入载体转化进入工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE进行检测,你完全不用考虑内含子的情况,如果表达以后构象不对你才需要考虑进行RT-PCR。你可以用试剂盒提取总RNA,Trizol试剂盒就行,然后按照RT-PCR步骤做就行。最后再进行检测。
5楼2016-12-28 18:45:33
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jmzLdmx

新虫 (初入文坛)

我一般做的是原核生物异源表达,不懂你可以给我发邮件。 jiangminzhi2006@126.com

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2016-12-28 18:48:18
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ninxia1

禁虫 (著名写手)

送红花一朵
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7楼2016-12-29 00:19:56
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