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双酶切连接转化平板长很多，但都是假阳性
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最近1个月做实验，每次构建表达载体平板上都是长很多单克隆，但送测后不是载体自连就是无信号。是载体没有完全切开？还是抗生素的问题？还是连接？ 用赛默飞的快切酶，一般切40分钟左右。用的酶切位点也是平时常用的。以前用同样的酶切20分钟都没什么问题 发自小木虫Android客户端 |
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mochenmi
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-11 08:26:47
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就是再仔细看看酶切位点是不是设计的合适，可能载体上还有另一个你用的酶切位点。 另外在pcr，提质粒甚至照紫外的时候都有可能发生突变，有一定概率形成一个酶切位点，这样载体就被切坏了。 如果老是做不出，建议重新提质粒再酶切，回收。不要一直用之前的回收产物做连接。 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2016-12-10 12:04:24
sky蒲公英
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我也在做这个，酶切的话载体最好过夜，尽可能的酶切完全。还有转化的时候可以做个对照 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-12-09 23:14:35
mochenmi
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:19
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仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小，看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的，刚做实验的新手也能成功。 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-12-09 23:50:07
4楼2016-12-10 00:14:37
