24小时热门版块排行榜    

查看: 2485  |  回复: 6

qqqqq0917

新虫 (初入文坛)

[交流] 重组蛋白真核表达后没有活性

我用PBac8载体构建质粒,在Sf9中用杆状病毒表达系统表达蛋白后在上清中用硫酸铵沉淀法和HIS标签纯化出蛋白,但是却没有脱乙酰活性。
基因是昆虫的几丁质脱乙酰酶,有三个结构域,其中几丁质结合结构域我测了可以与胶体几丁质结合,不知道为什么却没有脱乙酰活性?
请各位大神指点迷津。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqqqq0917

新虫 (初入文坛)

各位大神,看见的帮帮忙!!
2楼2016-12-08 20:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漓江魂

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是亲和珠,为啥还要用硫酸铵沉淀?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-12-12 02:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zengqiufang

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你们真核纯化,怎么操作?谢谢!之前都做的原核表达纯化。
最难得,表里俱澄清。人之本来面目,非空非有。
4楼2017-06-12 21:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

digimanual

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接镍柱亲和层析。
5楼2018-09-15 14:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengyansuo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zengqiufang at 2017-06-12 21:02:48
请问你们真核纯化,怎么操作?谢谢!之前都做的原核表达纯化。

原核纯化和真核纯化没有区别。你真核纯化是酵母发酵还是昆虫细胞发酵?
6楼2018-09-21 15:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengyansuo

新虫 (初入文坛)

蛋白没有活性原因是多方面的。1构建确定没有问题
2纯化过程中尽量冰浴,
3 也有可能在表达的过程中蛋白折叠错误,导致没有活性
7楼2018-09-21 15:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qqqqq0917 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 6/300 2026-09-03 15:23 by T0rGB46095mJ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 9/450 2026-09-03 15:21 by T0rGB46095mJ
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 14:48 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +8 gdd2018 2026-08-28 13/650 2026-09-03 06:22 by 羽毛枫f
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-03 03:14 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
信息提示
请填处理意见