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qqqqq0917

新虫 (初入文坛)

[交流] 重组蛋白真核表达后没有活性

我用PBac8载体构建质粒,在Sf9中用杆状病毒表达系统表达蛋白后在上清中用硫酸铵沉淀法和HIS标签纯化出蛋白,但是却没有脱乙酰活性。
基因是昆虫的几丁质脱乙酰酶,有三个结构域,其中几丁质结合结构域我测了可以与胶体几丁质结合,不知道为什么却没有脱乙酰活性?
请各位大神指点迷津。
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qqqqq0917

新虫 (初入文坛)

各位大神,看见的帮帮忙!!
2楼2016-12-08 20:53:55
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漓江魂

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是亲和珠,为啥还要用硫酸铵沉淀?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-12-12 02:18:37
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zengqiufang

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你们真核纯化,怎么操作?谢谢!之前都做的原核表达纯化。
最难得,表里俱澄清。人之本来面目,非空非有。
4楼2017-06-12 21:02:48
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digimanual

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接镍柱亲和层析。
5楼2018-09-15 14:02:48
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zengqiufang at 2017-06-12 21:02:48
请问你们真核纯化,怎么操作?谢谢!之前都做的原核表达纯化。

原核纯化和真核纯化没有区别。你真核纯化是酵母发酵还是昆虫细胞发酵?
6楼2018-09-21 15:37:09
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)

蛋白没有活性原因是多方面的。1构建确定没有问题
2纯化过程中尽量冰浴,
3 也有可能在表达的过程中蛋白折叠错误,导致没有活性
7楼2018-09-21 15:38:51
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