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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 重组蛋白真核表达后没有活性
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qqqqq0917

新虫 (初入文坛)

[交流] 重组蛋白真核表达后没有活性

我用PBac8载体构建质粒，在Sf9中用杆状病毒表达系统表达蛋白后在上清中用硫酸铵沉淀法和HIS标签纯化出蛋白，但是却没有脱乙酰活性。
基因是昆虫的几丁质脱乙酰酶，有三个结构域，其中几丁质结合结构域我测了可以与胶体几丁质结合，不知道为什么却没有脱乙酰活性？
请各位大神指点迷津。
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1楼 2016-12-08 20:25:45
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qqqqq0917

新虫 (初入文坛)
各位大神，看见的帮帮忙！！
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2楼2016-12-08 20:53:55
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漓江魂

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这是亲和珠，为啥还要用硫酸铵沉淀？

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-12-12 02:18:37
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zengqiufang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你们真核纯化，怎么操作？谢谢！之前都做的原核表达纯化。
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最难得，表里俱澄清。人之本来面目，非空非有。
4楼2017-06-12 21:02:48
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digimanual

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接镍柱亲和层析。
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5楼2018-09-15 14:02:48
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zengqiufang at 2017-06-12 21:02:48
请问你们真核纯化，怎么操作？谢谢！之前都做的原核表达纯化。

原核纯化和真核纯化没有区别。你真核纯化是酵母发酵还是昆虫细胞发酵？
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6楼2018-09-21 15:37:09
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shengyansuo

新虫 (初入文坛)
蛋白没有活性原因是多方面的。1构建确定没有问题
2纯化过程中尽量冰浴，
3 也有可能在表达的过程中蛋白折叠错误，导致没有活性
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7楼2018-09-21 15:38:51
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