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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！
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peitaokong

银虫 (小有名气)
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绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buffer(如果用水的话稳定性很差），这就变成了1*1E9（10的九次方）。然后你取5微升质粒，加入45微升的TE buffer，稀释成1*1E8（10的八次方）。照此稀释。
稀释标准品过程，一定要记着加完后，让溶液静置五分钟，分子充分运动混合均一，一定要带手套，找一个相对安静没有认来回走动的地方，来做这个事情，每稀释一个浓度注意换一次手套。希望能够帮助你。
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11楼2016-12-14 20:10:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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12楼2016-12-14 20:19:59
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zhaojieyumm

铜虫 (正式写手)
十级十级稀释

发自小木虫Android客户端
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13楼2016-12-14 21:35:43
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-14 20:10:42
绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buff ...

十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？
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14楼2016-12-14 22:42:53
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peitaokong

银虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-14 22:42:53
十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？...

体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟
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15楼2016-12-15 08:03:46
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-15 08:03:46
体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟...

好的好的，太感谢了！
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16楼2016-12-15 08:54:37
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紫檀花开

禁虫 (正式写手)
★
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17楼2018-08-09 16:20:37
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紫檀花开

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
18楼2018-08-09 16:21:41
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