应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！
182/2返回列表上一页12
查看: 5161  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buffer(如果用水的话稳定性很差），这就变成了1*1E9（10的九次方）。然后你取5微升质粒，加入45微升的TE buffer，稀释成1*1E8（10的八次方）。照此稀释。
稀释标准品过程，一定要记着加完后，让溶液静置五分钟，分子充分运动混合均一，一定要带手套，找一个相对安静没有认来回走动的地方，来做这个事情，每稀释一个浓度注意换一次手套。希望能够帮助你。
赞一下(6人) 回复此楼
11楼2016-12-14 20:10:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
内容已删除
回复此楼
12楼2016-12-14 20:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaojieyumm

铜虫 (正式写手)
十级十级稀释

发自小木虫Android客户端
回复此楼
13楼2016-12-14 21:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-14 20:10:42
绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buff ...

十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？
赞一下 回复此楼
14楼2016-12-14 22:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-14 22:42:53
十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？...

体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2016-12-15 08:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-15 08:03:46
体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟...

好的好的，太感谢了！
赞一下 回复此楼
16楼2016-12-15 08:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫檀花开

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
17楼2018-08-09 16:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫檀花开

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
18楼2018-08-09 16:21:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljf0814 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭