应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！
52/1返回列表
查看: 5168  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)

[交流] 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！ 已有6人参与

初次接触绝对定量PCR，要用质粒做标准品，做标准曲线。经计算后我的提取的质粒拷贝数为79205720169/ul，老师让我把质粒稀释成10的8次方个拷贝/ul到10个拷贝/ul，8个梯度，而且要很精确很，一个都不能差。我想了一下，感觉实在做不到那么精确，请问这样该如何稀释？谢谢各位大神！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-12-08 16:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-14 20:10:42
绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buff ...

十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？
赞一下 回复此楼
14楼2016-12-14 22:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

许彦

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:31:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-12-08 17:12:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-08 17:12:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。
赞一下 回复此楼
3楼2016-12-08 17:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-08 17:18:36
我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。...

你老师不是搞分子生物的吧，

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2016-12-08 22:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭