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ljf0814

铜虫 (初入文坛)

[交流] 绝对定量标准品质粒稀释问题求助! 已有6人参与

初次接触绝对定量PCR,要用质粒做标准品,做标准曲线。经计算后我的提取的质粒拷贝数为79205720169/ul,老师让我把质粒稀释成10的8次方个拷贝/ul到10个拷贝/ul,8个梯度,而且要很精确很,一个都不能差。我想了一下,感觉实在做不到那么精确,请问这样该如何稀释?谢谢各位大神!
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-14 20:10:42
绝对定量,标准品确实需要精确稀释,因为标准品是用来构建标准曲线,用来计算拷贝数的,肯定要准。首先你要换算成科学计算法,你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思),然后稀释79.2倍,取5微升质粒,加391微升TE buff ...

十分感谢你,写得太详细了!我还想问一下,让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀?静置需要在冰上吗?
14楼2016-12-14 22:42:53
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许彦

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:31:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释,震荡,离心。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-12-08 17:12:18
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-08 17:12:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释,震荡,离心。

我之前这样做了一次,但老师说不行,必须严格稀释,也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒,最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。
3楼2016-12-08 17:18:36
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许彦

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-08 17:18:36
我之前这样做了一次,但老师说不行,必须严格稀释,也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒,最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。...

你老师不是搞分子生物的吧,

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4楼2016-12-08 22:14:51
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