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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)

[交流] 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！ 已有6人参与

初次接触绝对定量PCR，要用质粒做标准品，做标准曲线。经计算后我的提取的质粒拷贝数为79205720169/ul，老师让我把质粒稀释成10的8次方个拷贝/ul到10个拷贝/ul，8个梯度，而且要很精确很，一个都不能差。我想了一下，感觉实在做不到那么精确，请问这样该如何稀释？谢谢各位大神！
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1楼 2016-12-08 16:29:00
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-15 08:03:46
体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟...

好的好的，太感谢了！
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16楼2016-12-15 08:54:37
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许彦

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:31:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

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2楼2016-12-08 17:12:18
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-08 17:12:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。
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3楼2016-12-08 17:18:36
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许彦

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-08 17:18:36
我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。...

你老师不是搞分子生物的吧，

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4楼2016-12-08 22:14:51
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