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绝对定量标准品质粒稀释问题求助！ 已有6人参与
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| 初次接触绝对定量PCR，要用质粒做标准品，做标准曲线。经计算后我的提取的质粒拷贝数为79205720169/ul，老师让我把质粒稀释成10的8次方个拷贝/ul到10个拷贝/ul，8个梯度，而且要很精确很，一个都不能差。我想了一下，感觉实在做不到那么精确，请问这样该如何稀释？谢谢各位大神！ |
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peitaokong
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绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buffer(如果用水的话稳定性很差），这就变成了1*1E9（10的九次方）。然后你取5微升质粒，加入45微升的TE buffer，稀释成1*1E8（10的八次方）。照此稀释。 稀释标准品过程，一定要记着加完后，让溶液静置五分钟，分子充分运动混合均一，一定要带手套，找一个相对安静没有认来回走动的地方，来做这个事情，每稀释一个浓度注意换一次手套。希望能够帮助你。 |
11楼2016-12-14 20:10:42
4楼2016-12-08 22:14:51
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:31:18
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差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-12-08 17:12:18
10楼2016-12-12 10:26:30
peitaokong
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