应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！
181/2返回列表12下一页
查看: 5528  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ljf0814

铜虫 (初入文坛)

[交流] 绝对定量标准品质粒稀释问题求助！ 已有6人参与

初次接触绝对定量PCR，要用质粒做标准品，做标准曲线。经计算后我的提取的质粒拷贝数为79205720169/ul，老师让我把质粒稀释成10的8次方个拷贝/ul到10个拷贝/ul，8个梯度，而且要很精确很，一个都不能差。我想了一下，感觉实在做不到那么精确，请问这样该如何稀释？谢谢各位大神！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-12-08 16:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
绝对定量，标准品确实需要精确稀释，因为标准品是用来构建标准曲线，用来计算拷贝数的，肯定要准。首先你要换算成科学计算法，你这个是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀释79.2倍，取5微升质粒，加391微升TE buffer(如果用水的话稳定性很差），这就变成了1*1E9（10的九次方）。然后你取5微升质粒，加入45微升的TE buffer，稀释成1*1E8（10的八次方）。照此稀释。
稀释标准品过程，一定要记着加完后，让溶液静置五分钟，分子充分运动混合均一，一定要带手套，找一个相对安静没有认来回走动的地方，来做这个事情，每稀释一个浓度注意换一次手套。希望能够帮助你。
赞一下(6人) 回复此楼
11楼2016-12-14 20:10:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-08 17:18:36
我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。...

你老师不是搞分子生物的吧，

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2016-12-08 22:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:31:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-12-08 17:12:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-11 23:47:59
楼主问一下，质粒拷贝数是怎么算的？能直接测嘛？我只知道测质粒的浓度，单位是ng\ul

还要算出质粒的分子质量，也就知道质粒的摩尔质量M，用OD/M，再乘以阿伏伽德罗常数就行了，注意单位统一。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2016-12-12 10:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-14 22:42:53
十分感谢你，写得太详细了！我还想问一下，让溶液静置五分钟后还需不需要用枪或者震荡混匀？静置需要在冰上吗？...

体系加好后，需要振荡混匀，最好不要用枪混匀，然后短暂离心一下，再静置五分钟
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2016-12-15 08:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-08 17:12:18
差不多就行。个人建议10ul+90ul这样稀释，震荡，离心。

我之前这样做了一次，但老师说不行，必须严格稀释，也就是说最小的梯度中每微升只能有10个质粒，最大的梯度中每微升只能有10的8次方个质粒。我就不知道该怎么稀释比较好了。
赞一下 回复此楼
3楼2016-12-08 17:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-08 22:14:51
你老师不是搞分子生物的吧，
...

专门做分子的，他说他做实验就是这么做的。。。
赞一下 回复此楼
5楼2016-12-08 22:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ljf0814 at 2016-12-08 22:41:07
专门做分子的，他说他做实验就是这么做的。。。...

祝好

发自小木虫Android客户端
回复此楼
6楼2016-12-09 05:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoxie2020

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没必要啊，90+10，3个9

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-12-09 07:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoxie2020 at 2016-12-09 07:54:41
没必要啊，90+10，3个9

我也觉得没必要，可是老师就让这么做。。。
赞一下 回复此楼
8楼2016-12-09 12:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主问一下，质粒拷贝数是怎么算的？能直接测嘛？我只知道测质粒的浓度，单位是ng\ul

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-12-11 23:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljf0814 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 F4zcb7xRCEJA 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:51 by pMlf9MbdMHyc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-11 4/200 2026-08-11 21:15 by thgx1vqMqrLw
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:09 by thgx1vqMqrLw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-11 3/150 2026-08-11 20:51 by thgx1vqMqrLw
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-10 7/350 2026-08-11 20:39 by thgx1vqMqrLw
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-10 8/400 2026-08-11 19:56 by thgx1vqMqrLw
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭