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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 最近在做EMSA的实验，可是总是检测不到迁移的band, 请教是什么原因？
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cerycery

金虫 (小有名气)

[交流] 最近在做EMSA的实验，可是总是检测不到迁移的band, 请教是什么原因？ 已有3人参与

最近在做HIF-1a在iNOSpromoter上的binding 的EMSA实验，探针是根据文献设计，然后找华大基因合成的5'-biotin的探针，回来将单链黏连成双链，然后做EMSA，使用的是thermo Fisher lightshift ＥＭＳＡ　ｋｉｔ，可是做了多次，总是检测不到迁移ｂａｎｄ，请教一下是什么原因
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1楼 2016-12-07 19:10:57
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-08 07:39:16
仔细阅读所用kit说明书，先用binding buffer测试，不加NP-40等东西，poly(dIdC)得加

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2楼2016-12-08 06:23:30
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cerycery

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-12-08 06:23:30
仔细阅读所用kit说明书，先用binding buffer测试，不加NP-40等东西，poly(dIdC)得加

谢谢你。我还有一个问题，就是paper中用的是同位素标记的探针，而且在反应体系中加入了0.4 ug denatured calf thymus DNA, 我想问一下加入denatured calf thymus DNA的作用，还有我跑不出条带是不是跟denatured calf thymus DNA有关呢？
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3楼2016-12-08 12:09:57
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
就是竞争性DNA，为了减少非特异结合，跟poly(dIdC)作用类似，可以先不加

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4楼2016-12-09 13:06:33
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cerycery

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-12-09 13:06:33
就是竞争性DNA，为了减少非特异结合，跟poly(dIdC)作用类似，可以先不加

哦，这样啊，谢谢你啦。以后还要向你多多请教
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5楼2016-12-09 14:47:06
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cerycery at 2016-12-09 14:47:06
哦，这样啊，谢谢你啦。以后还要向你多多请教...

好

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6楼2016-12-09 22:54:18
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snowsun04006

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想请问一下单链探针怎样变成双链的具体的步骤能告诉我一下吗？谢谢

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7楼2017-04-03 17:00:07
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snowsun04006

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
碧云天生物素标记试剂盒里面提到3端标记生物素不会影响其DNA与蛋白的结合

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8楼2017-04-10 08:38:03
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snowsun04006

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有请问一下你送去合成的生物素标记探针是正反链都标记吗？还是只标记一条链

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9楼2017-04-10 08:47:50
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wilwis

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by snowsun04006 at 2017-04-10 08:47:50
还有请问一下你送去合成的生物素标记探针是正反链都标记吗？还是只标记一条链

两条链都要标记
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10楼2018-06-19 08:20:41
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