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cerycery

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[交流] 最近在做EMSA的实验，可是总是检测不到迁移的band, 请教是什么原因？已有3人参与

最近在做HIF-1a在iNOSpromoter上的binding 的EMSA实验，探针是根据文献设计，然后找华大基因合成的5'-biotin的探针，回来将单链黏连成双链，然后做EMSA，使用的是thermo Fisher lightshift ＥＭＳＡ　ｋｉｔ，可是做了多次，总是检测不到迁移ｂａｎｄ，请教一下是什么原因

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1楼 2016-12-07 19:10:57

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fengshen2005

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仔细阅读所用kit说明书，先用binding buffer测试，不加NP-40等东西，poly(dIdC)得加

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2楼2016-12-08 06:23:30

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cerycery

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引用回帖:

2楼: Originally posted by fengshen2005 at 2016-12-08 06:23:30
仔细阅读所用kit说明书，先用binding buffer测试，不加NP-40等东西，poly(dIdC)得加

谢谢你。我还有一个问题，就是paper中用的是同位素标记的探针，而且在反应体系中加入了0.4 ug denatured calf thymus DNA, 我想问一下加入denatured calf thymus DNA的作用，还有我跑不出条带是不是跟denatured calf thymus DNA有关呢？

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3楼2016-12-08 12:09:57

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