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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qRT-PCR溶解曲线分析
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喵喵小猫鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] qRT-PCR溶解曲线分析 已有1人参与

前两天对一批样品做了荧光定量检测，结果溶解曲线出现了如下图中的各种情况，求助各位，这些图中分别能说明什么问题，该怎么解决啊？并且我这次的结果出来内参（GAPDH）跑的不齐，相差最大的有2个循环，是哪里出了问题呢？

qRT-PCR溶解曲线分析
A1.PNG


qRT-PCR溶解曲线分析-1
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qRT-PCR溶解曲线分析-2
A12.PNG


qRT-PCR溶解曲线分析-3
E7.PNG


qRT-PCR溶解曲线分析-4
K8.PNG
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1楼 2016-12-06 15:57:17
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fenghuwuyu

木虫 (正式写手)

懒
没人回答吗？我也遇到了这个问题
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信不信由你
2楼2016-12-22 09:19:53
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主应该每个基因对应的溶解曲线列出几条，你这一个图就一个曲线，显得有些单薄。溶解曲线是反映引物的特性的。溶解曲线主峰为单峰说明引物特异性好，如果是双峰或则多峰说明引物特异性差，那就得重新设计引物。还有一个就是主峰的Tm值，一般情况在85度左右，如果太低，那就是引物非特异性扩增，含有引物二聚体，这种情况也得重新设计引物。你可以一个基因多列出一些溶解曲线，这样才能准确的判断，到底是引物问题，还是模板问题等。希望能够帮助你。
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3楼2016-12-22 12:04:52
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