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喵喵小猫鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] qRT-PCR溶解曲线分析已有1人参与

前两天对一批样品做了荧光定量检测,结果溶解曲线出现了如下图中的各种情况,求助各位,这些图中分别能说明什么问题,该怎么解决啊?并且我这次的结果出来内参(GAPDH)跑的不齐,相差最大的有2个循环,是哪里出了问题呢?

qRT-PCR溶解曲线分析
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qRT-PCR溶解曲线分析-1
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qRT-PCR溶解曲线分析-2
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qRT-PCR溶解曲线分析-3
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qRT-PCR溶解曲线分析-4
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fenghuwuyu

木虫 (正式写手)

没人回答吗?我也遇到了这个问题
信不信由你
2楼2016-12-22 09:19:53
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主应该每个基因对应的溶解曲线列出几条,你这一个图就一个曲线,显得有些单薄。溶解曲线是反映引物的特性的。溶解曲线主峰为单峰说明引物特异性好,如果是双峰或则多峰说明引物特异性差,那就得重新设计引物。还有一个就是主峰的Tm值,一般情况在85度左右,如果太低,那就是引物非特异性扩增,含有引物二聚体,这种情况也得重新设计引物。你可以一个基因多列出一些溶解曲线,这样才能准确的判断,到底是引物问题,还是模板问题等。希望能够帮助你。
3楼2016-12-22 12:04:52
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