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PCR产物酶切连接pET 28a，测序发现引物部分碱基缺一个C
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最近实验一直不顺利，各种突变和缺失，累觉不爱。 上游引物加了保护碱基和Ndel/Xbal酶切位点，引物开头是5’-tctagaCATATGGCCAG......... 测序回来，峰图很干净，完全没有套峰。  突变的碱基就不管了，但是开头CATATGGCAG， 少了个C！！！后面都乱码了，跪。。。。。  问了生工测序，也回答说测序没问题。 我觉得也不该是KOD酶的问题吧，毕竟在引物上呢，也能突变缺失吗？会不会是引物本身少了C导致的，虽然检测报告写的正常。 |
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