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萧晓1993银虫 (小有名气)
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实时荧光PCR绘制标准曲线出现问题已有1人参与
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各位大神，我是使用的AbI7300实时荧光定量PCR仪器进行目的基因的标准曲线绘制，采用SBBR-Green荧光染料，按10倍进行梯度稀释，反反应体系配制： 1、每孔体系 20µL primer-F1 0.4 µL primer-R1 0.4 µL SYBR Green Master（ROX） 12 µL ddH2O 7.2 µL 2、PCR 扩增程序：95℃预变性10min；95℃ 10s，60℃ 1min，以此进行 45 个循环；反应结束。 由下面的图感觉很奇怪，就是第一个1：100倍的稀释度的时候，曲线突然往下走了？还有溶解曲线有杂峰，说明是有引物二聚体，应该怎样解决呀？求大神们指教  2016-11-26-1.jpg  2016-11-26tm2.jpg@biostar2009 |
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萧晓19934楼2016-11-27 19:58:10
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2楼2016-11-27 12:39:27
萧晓1993
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6楼2016-11-27 22:20:56
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8楼2016-11-27 23:03:13
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9楼2016-11-27 23:32:36
10楼2016-11-28 07:47:11