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铜虫 (小有名气)

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虫号: 3020799
注册: 2014-03-05
性别: GG
专业: 食品科学基础

[交流] 硫酸铵沉淀和疏水层析已有2人参与

请问都说硫酸铵沉淀后的蛋白适宜直接上样疏水柱，可是该怎么确定样品的盐浓度和平衡缓冲液一致呢？还有就是关于硫酸铵沉淀的问题，我能不能用超滤管浓缩完蛋白后再用硫酸铵沉淀，这样就可以少用些硫酸铵了，因为发酵液体积太大了~

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1楼 2016-11-25 08:19:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

earth

木虫 (小有名气)

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虫号: 181078
注册: 2006-02-10
专业: biology

★
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试一下下列步骤：硫酸铵沉淀后，用少量无硫酸铵的缓冲液溶解沉淀，然后再加1/8体积饱和硫酸铵溶液，然后上疏水柱【事先用50 mM Tris-HC1 (缓冲体系和pH 根据实际情况), 1 mM EDTA（根据实际情况）, 2 mM DTT（根据实际情况）, 900 mM (NH4)2SO4 平衡】，蛋白用 900至 50 mM (NH4)2SO4 线性梯度洗脱。