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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 硫酸铵沉淀和疏水层析
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铜虫 (小有名气)

[交流] 硫酸铵沉淀和疏水层析 已有2人参与

请问都说硫酸铵沉淀后的蛋白适宜直接上样疏水柱，可是该怎么确定样品的盐浓度和平衡缓冲液一致呢？还有就是关于硫酸铵沉淀的问题，我能不能用超滤管浓缩完蛋白后再用硫酸铵沉淀，这样就可以少用些硫酸铵了，因为发酵液体积太大了~

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1楼 2016-11-25 08:19:14
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楠木dfe

新虫 (初入文坛)
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浓缩后蛋白浓度会升，硫酸铵加下去容易沉淀出蛋白，不利于挂柱

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2楼2016-11-25 10:10:46
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 楠木dfe at 2016-11-25 10:10:46
浓缩后蛋白浓度会升，硫酸铵加下去容易沉淀出蛋白，不利于挂柱

就是要盐析然后复融呀，就是不确定复融后盐浓度多少，怎么保证和疏水的平衡缓冲液盐浓度一致~

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3楼2016-11-25 10:14:49
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楠木dfe

新虫 (初入文坛)
测试一下电导吧

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4楼2016-11-25 11:13:18
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楠木dfe

新虫 (初入文坛)
★
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我做疏水时一般控制在电导130到170都可以挂柱

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5楼2016-11-25 11:14:24
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楠木dfe

新虫 (初入文坛)
差不多是1M的浓度

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6楼2016-11-25 11:15:07
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earth

木虫 (小有名气)
★
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试一下下列步骤： 硫酸铵沉淀后，用少量无硫酸铵的缓冲液溶解沉淀，然后再加1/8体积饱和硫酸铵溶液，然后上疏水柱【事先用50 mM Tris-HC1  (缓冲体系和pH 根据实际情况),  1 mM EDTA（根据实际情况）,  2  mM DTT（根据实际情况）, 900 mM  (NH4)2SO4 平衡】，蛋白用  900至 50  mM  (NH4)2SO4 线性梯度洗脱。
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7楼2016-11-27 15:37:18
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