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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[交流] 分子量太大的蛋白怎么纯化?

重组蛋白分子量太大,110KD左右,镍柱纯化一直不成功,试了一系列咪唑梯度,每次都是杂蛋白跟着目的蛋白一起洗脱下来。甚至10mM咪唑都能把目的蛋白一下来,这跟镍柱的结合能力我也是醉了。80KD左右有一条杂蛋白就跟牛皮糖似的,跟目的蛋白如影随形。
我用的pet32a载体,有两个his标签。在不重新设计添加his标签的引物的情况下,该怎么获得纯化蛋白呢?急求,在线等!

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hanjun80

金虫 (正式写手)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-24 07:45:15
离子交换层析或者凝胶排阻层析,再或者大孔径超滤膜。
有数种方案可以搞定
我笃信:人定胜天!
2楼2016-11-24 05:35:01
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xudech

木虫 (正式写手)

xiaochong

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-24 07:45:34
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

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3楼2016-11-24 07:05:38
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
3楼: Originally posted by xudech at 2016-11-24 07:05:38
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

那该怎么办呢?

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4楼2016-11-24 08:30:25
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
2楼: Originally posted by hanjun80 at 2016-11-24 05:35:01
离子交换层析或者凝胶排阻层析,再或者大孔径超滤膜。
有数种方案可以搞定

还在不?能具体说说嘛?可以的话能私下QQ吗?快毕业了,蛋白还没搞定,很着急
5楼2016-12-15 20:31:13
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

引用回帖:
3楼: Originally posted by xudech at 2016-11-24 07:05:38
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

还在不?能具体说说吗?很着急
6楼2016-12-15 20:32:32
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mataomatao

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

7楼2016-12-18 10:03:59
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yunyu818

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

8楼2016-12-19 12:06:11
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star013

新虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们可以提供蛋白纯化技术服务

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9楼2016-12-19 12:18:15
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