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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 分子量太大的蛋白怎么纯化？
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

[交流] 分子量太大的蛋白怎么纯化？

重组蛋白分子量太大，110KD左右，镍柱纯化一直不成功，试了一系列咪唑梯度，每次都是杂蛋白跟着目的蛋白一起洗脱下来。甚至10mM咪唑都能把目的蛋白一下来，这跟镍柱的结合能力我也是醉了。80KD左右有一条杂蛋白就跟牛皮糖似的，跟目的蛋白如影随形。
我用的pet32a载体，有两个his标签。在不重新设计添加his标签的引物的情况下，该怎么获得纯化蛋白呢？急求，在线等！

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1楼 2016-11-23 22:41:20
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hanjun80

金虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-24 07:45:15
离子交换层析或者凝胶排阻层析，再或者大孔径超滤膜。
有数种方案可以搞定
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我笃信:人定胜天！
2楼2016-11-24 05:35:01
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xudech

木虫 (正式写手)

xiaochong
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-24 07:45:34
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

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3楼2016-11-24 07:05:38
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
3楼: Originally posted by xudech at 2016-11-24 07:05:38
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

那该怎么办呢？

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4楼2016-11-24 08:30:25
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanjun80 at 2016-11-24 05:35:01
离子交换层析或者凝胶排阻层析，再或者大孔径超滤膜。
有数种方案可以搞定

还在不？能具体说说嘛？可以的话能私下QQ吗？快毕业了，蛋白还没搞定，很着急
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5楼2016-12-15 20:31:13
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上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海
引用回帖:
3楼: Originally posted by xudech at 2016-11-24 07:05:38
和杂蛋白一起下来应该是His被包埋了 与大蛋白无关

还在不？能具体说说吗？很着急
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6楼2016-12-15 20:32:32
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
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7楼2016-12-18 10:03:59
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yunyu818

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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8楼2016-12-19 12:06:11
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star013

新虫 (知名作家)
★
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我们可以提供蛋白纯化技术服务

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9楼2016-12-19 12:18:15
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