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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 波谱分析 » 使用UPLC建立分析方法时遇到的问题
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asd789333

新虫 (初入文坛)

[求助] 使用UPLC建立分析方法时遇到的问题 已有3人参与

我使用的是WATERS 的UPLC 柱子1.7um 长度5cm的柱子 现在正在分离花青素（一种带糖的黄酮类物质） 我在建立一个UPLC的分析方法

我的流动相A 是3%的甲酸水（0.1%的TFA） B 是15%的甲醇乙腈  我现在遇到的问题是无论是何种比例的流动相我都无法分开待测物质 文献报道 应该有13种组分在里面

图A     是纯B 相冲的 流速0.02mL/min



图B   这个是用95%的A 5%的B 等度冲的 流速0.02mL/min



现在我无论如何设置梯度  出峰总是在固定时间段 而我认为所有的峰都集中到一块了（图）

我现在想请教的问题

1.我的流动相的选择存在问题吗？是不是要把流动相A的酸度在调高一点，这些流动相是参考HPLC的方法

2.是不是梯度洗脱可以改变出峰时间，从而把峰都分开。

3.我要如何设计梯度，给不给说一下大概的想法

4.UPLC的流速正常在什么范围内，0.02mL/min 7min就出完峰，这个正常么？流速会不会太低。这个柱子是不是有问题。

5.HPLC的分析方法对UPLC方法的建立有参考价值吗？

使用UPLC建立分析方法时遇到的问题
IMG_20161121_164049.jpg


使用UPLC建立分析方法时遇到的问题-1
IMG_20161121_170023.jpg@wyy080214
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1楼 2016-11-21 22:14:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shi102241218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超高效的话你的流速也太低了，，峰这么宽体现不出超高效的优势
酸度太高，一般色谱柱承受百分之零点几，而且你是两种酸
样品浓度太高
你的两个流动相有天壤之别，无法确定是不是流动相问题
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2楼2016-11-22 10:00:14
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bolic

新虫 (小有名气)
UPLC本来出峰就很快的，新机器一秒能扫描两百次，一两秒一个峰都可以分开(当然这只是仪器商说的。。。)，你的峰太宽才是问题。

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13楼2016-11-23 08:29:06
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普通回帖

asd789333

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-22 10:00:14
超高效的话你的流速也太低了，，峰这么宽体现不出超高效的优势
酸度太高，一般色谱柱承受百分之零点几，而且你是两种酸
样品浓度太高
你的两个流动相有天壤之别，无法确定是不是流动相问题

大神啊 那我现在应该怎么办？
请问我该如何更换流动相
更换完流动相我下来该做些什么
我现在实在建立uplc的分析方法 真参考的文献几乎是HPLC的   柱子是2.1*50mm  1.7um的
真心跪求你的回复啊  做了半个月了 一点进展也没

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3楼2016-11-22 11:42:05
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shi102241218

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by asd789333 at 2016-11-22 11:42:05
大神啊 那我现在应该怎么办？
请问我该如何更换流动相
更换完流动相我下来该做些什么
我现在实在建立uplc的分析方法 真参考的文献几乎是HPLC的   柱子是2.1*50mm  1.7um的
真心跪求你的回复啊  做了半个月了 一点 ...

流动相25%的B,等度，流速0.2；进样0.2uL，样品浓度在十ppm左右，试一下看结果再说
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4楼2016-11-22 11:48:23
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asd789333

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-22 11:48:23
流动相25%的B,等度，流速0.2；进样0.2uL，样品浓度在十ppm左右，试一下看结果再说...

嗯嗯

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5楼2016-11-22 11:48:59
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stingdhk

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的参考文献哪年的，靠谱么？3%甲酸水，酸度太高。。现在用的比较多的是0.1%，0.2%左右吧。。
UPLC常用流速是0.2-0.4ml/min，一般不会超过0.5ml/min，但也没见过用0.02ml/min的
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6楼2016-11-22 11:58:01
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asd789333

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stingdhk at 2016-11-22 11:58:01
你的参考文献哪年的，靠谱么？3%甲酸水，酸度太高。。现在用的比较多的是0.1%，0.2%左右吧。。
UPLC常用流速是0.2-0.4ml/min，一般不会超过0.5ml/min，但也没见过用0.02ml/min的

我在建立UPLC的分析方法 可参考的文献不多 我参考的是HPLC的色谱条件

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7楼2016-11-22 12:03:25
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asd789333

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by asd789333 at 2016-11-22 12:03:25
我在建立UPLC的分析方法 可参考的文献不多 我参考的是HPLC的色谱条件
...

我试过0.2左右的速度 感觉峰全部挤到一块了 所以才放慢速度的

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8楼2016-11-22 12:05:05
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asd789333

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-22 10:00:14
超高效的话你的流速也太低了，，峰这么宽体现不出超高效的优势
酸度太高，一般色谱柱承受百分之零点几，而且你是两种酸
样品浓度太高
你的两个流动相有天壤之别，无法确定是不是流动相问题

请问我把流动相A换成什么合适  你刚说这个酸度太高了

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9楼2016-11-22 12:06:42
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虫飞虫虫虫飞

新虫 (初入文坛)
流速太低了一般要我都是用0.4

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10楼2016-11-22 12:38:48
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