24小时热门版块排行榜    

查看: 3272  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

asd789333

新虫 (初入文坛)

[求助] 使用UPLC建立分析方法时遇到的问题 已有3人参与

我使用的是WATERS 的UPLC 柱子1.7um 长度5cm的柱子 现在正在分离花青素(一种带糖的黄酮类物质) 我在建立一个UPLC的分析方法

我的流动相A 是3%的甲酸水(0.1%的TFA) B 是15%的甲醇乙腈  我现在遇到的问题是无论是何种比例的流动相我都无法分开待测物质 文献报道 应该有13种组分在里面

图A     是纯B 相冲的 流速0.02mL/min



图B   这个是用95%的A 5%的B 等度冲的 流速0.02mL/min



现在我无论如何设置梯度  出峰总是在固定时间段 而我认为所有的峰都集中到一块了(图)

我现在想请教的问题

1.我的流动相的选择存在问题吗?是不是要把流动相A的酸度在调高一点,这些流动相是参考HPLC的方法

2.是不是梯度洗脱可以改变出峰时间,从而把峰都分开。

3.我要如何设计梯度,给不给说一下大概的想法

4.UPLC的流速正常在什么范围内,0.02mL/min 7min就出完峰,这个正常么?流速会不会太低。这个柱子是不是有问题。

5.HPLC的分析方法对UPLC方法的建立有参考价值吗?

使用UPLC建立分析方法时遇到的问题
IMG_20161121_164049.jpg


使用UPLC建立分析方法时遇到的问题-1
IMG_20161121_170023.jpg@wyy080214
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asd789333

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-22 10:00:14
超高效的话你的流速也太低了,,峰这么宽体现不出超高效的优势
酸度太高,一般色谱柱承受百分之零点几,而且你是两种酸
样品浓度太高
你的两个流动相有天壤之别,无法确定是不是流动相问题

大神啊 那我现在应该怎么办?
请问我该如何更换流动相
更换完流动相我下来该做些什么
我现在实在建立uplc的分析方法 真参考的文献几乎是HPLC的   柱子是2.1*50mm  1.7um的
真心跪求你的回复啊  做了半个月了 一点进展也没

发自小木虫Android客户端
3楼2016-11-22 11:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

shi102241218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
超高效的话你的流速也太低了,,峰这么宽体现不出超高效的优势
酸度太高,一般色谱柱承受百分之零点几,而且你是两种酸
样品浓度太高
你的两个流动相有天壤之别,无法确定是不是流动相问题
2楼2016-11-22 10:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shi102241218

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by asd789333 at 2016-11-22 11:42:05
大神啊 那我现在应该怎么办?
请问我该如何更换流动相
更换完流动相我下来该做些什么
我现在实在建立uplc的分析方法 真参考的文献几乎是HPLC的   柱子是2.1*50mm  1.7um的
真心跪求你的回复啊  做了半个月了 一点 ...

流动相25%的B,等度,流速0.2;进样0.2uL,样品浓度在十ppm左右,试一下看结果再说
4楼2016-11-22 11:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asd789333

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-22 11:48:23
流动相25%的B,等度,流速0.2;进样0.2uL,样品浓度在十ppm左右,试一下看结果再说...

嗯嗯

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-22 11:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见