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钾釉

新虫 (初入文坛)

[交流] 酶切连接失败,失败,然后失败了。。。 已有2人参与

跪求大神帮助啊,近期做酶切连接一直连接不上,前期是把我连T载的片段酶切与我的质粒双酶切后做连接,但由于我连接T载的片段大小与T载体大小太接近,相差400bp,酶切跑胶后虽然分开了,但切胶回收后做连接一直出现假阳性,PCR能P出我要的片段大小,但酶切验证发现均为原先连T载的东西(切胶不干净),由于我的质粒抗性与T载抗性相同,因此没办法再做验证了,几次加大胶的厚度,延长跑电泳的时间后仍然出现现有状况;后来改变计划,直接通过PCR获取我的目的片段,胶回收后酶切,再连接,但连接后板上不长菌。。。我用的酶是EcoRI,Nco I ;是我PCR产物酶切没有切开吗?orz...
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saveline

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能是没有连接上

发自小木虫Android客户端
2楼2017-06-11 17:20:07
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3楼2018-03-14 14:43:32
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