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酶切连接失败，失败，然后失败了。。。已有2人参与
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| 跪求大神帮助啊，近期做酶切连接一直连接不上，前期是把我连T载的片段酶切与我的质粒双酶切后做连接，但由于我连接T载的片段大小与T载体大小太接近，相差400bp，酶切跑胶后虽然分开了，但切胶回收后做连接一直出现假阳性，PCR能P出我要的片段大小，但酶切验证发现均为原先连T载的东西（切胶不干净），由于我的质粒抗性与T载抗性相同，因此没办法再做验证了，几次加大胶的厚度，延长跑电泳的时间后仍然出现现有状况；后来改变计划，直接通过PCR获取我的目的片段，胶回收后酶切，再连接，但连接后板上不长菌。。。我用的酶是EcoRI，Nco I ;是我PCR产物酶切没有切开吗？orz... |
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