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酶切连接失败,失败,然后失败了。。。 已有2人参与
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| 跪求大神帮助啊,近期做酶切连接一直连接不上,前期是把我连T载的片段酶切与我的质粒双酶切后做连接,但由于我连接T载的片段大小与T载体大小太接近,相差400bp,酶切跑胶后虽然分开了,但切胶回收后做连接一直出现假阳性,PCR能P出我要的片段大小,但酶切验证发现均为原先连T载的东西(切胶不干净),由于我的质粒抗性与T载抗性相同,因此没办法再做验证了,几次加大胶的厚度,延长跑电泳的时间后仍然出现现有状况;后来改变计划,直接通过PCR获取我的目的片段,胶回收后酶切,再连接,但连接后板上不长菌。。。我用的酶是EcoRI,Nco I ;是我PCR产物酶切没有切开吗?orz... |
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