24小时热门版块排行榜    

查看: 3319  |  回复: 8

声线青鸟

新虫 (小有名气)

[交流] 同源臂一直p不出来

最近想删除一个基因,但是,目的基因的上下游同源臂一直p不出来,没有条带。10ul体系有条带,扩增50ul就没有了,为什么呢?在下刚接触分子生物,求各位大神给点建议~

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
优化条件,或者换引物
2楼2016-12-09 20:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做个温梯,不行的话就换引物,反正是同源臂长一点无所谓
3楼2016-12-10 12:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同源臂的大小是多少呢,10微升扩增效果好么?下次pcr的时候,可以做一管10微的为对照,如果10μ可以,50μ不行,那估计是体系大pcr效果不好,你可以都分装成10μ进行扩增。如果都不行,多半是基因组模板降解等原因。如果10μ特异性不好,估计就是引物特异性问题,可以优化pcr条件,或者换引物,祝好!

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-12-10 21:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑傲江鱼

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同源臂我们一直都是50ul体系的,有两个基因的上下臂扩不出来,其他都可以一次搞定

发自小木虫Android客户端
5楼2016-12-12 13:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-12-09 20:13:14
优化条件,或者换引物

上下游引物退火温度相差比较大,会不会有影响?

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-12-15 12:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-12-10 21:47:48
同源臂的大小是多少呢,10微升扩增效果好么?下次pcr的时候,可以做一管10微的为对照,如果10μ可以,50μ不行,那估计是体系大pcr效果不好,你可以都分装成10μ进行扩增。如果都不行,多半是基因组模板降解等原因。 ...

同源臂大小是2000,会不会太长

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-12-15 12:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 声线青鸟 at 2016-12-15 07:54:38
上下游引物退火温度相差比较大,会不会有影响?
...

会有影响啊,两者接近,不要差太多

发自小木虫Android客户端
8楼2016-12-15 14:02:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

现在只有基因片段下游同源臂有,上游的一直p不出来,各位大神有遇见过这种情况么?

发自小木虫IOS客户端
9楼2016-12-15 14:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 声线青鸟 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 299求调剂 +5 某某某某位 2026-03-21 5/250 2026-03-23 23:36 by 热情沙漠
[考研] 材料292调剂 +4 橘颂思美人 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:16 by peike
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
信息提示
请填处理意见