24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3370  |  回复: 8

声线青鸟

新虫 (小有名气)

[交流] 同源臂一直p不出来

最近想删除一个基因,但是,目的基因的上下游同源臂一直p不出来,没有条带。10ul体系有条带,扩增50ul就没有了,为什么呢?在下刚接触分子生物,求各位大神给点建议~

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
优化条件,或者换引物
2楼2016-12-09 20:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做个温梯,不行的话就换引物,反正是同源臂长一点无所谓
3楼2016-12-10 12:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同源臂的大小是多少呢,10微升扩增效果好么?下次pcr的时候,可以做一管10微的为对照,如果10μ可以,50μ不行,那估计是体系大pcr效果不好,你可以都分装成10μ进行扩增。如果都不行,多半是基因组模板降解等原因。如果10μ特异性不好,估计就是引物特异性问题,可以优化pcr条件,或者换引物,祝好!

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-12-10 21:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑傲江鱼

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同源臂我们一直都是50ul体系的,有两个基因的上下臂扩不出来,其他都可以一次搞定

发自小木虫Android客户端
5楼2016-12-12 13:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-12-09 20:13:14
优化条件,或者换引物

上下游引物退火温度相差比较大,会不会有影响?

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-12-15 12:54:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-12-10 21:47:48
同源臂的大小是多少呢,10微升扩增效果好么?下次pcr的时候,可以做一管10微的为对照,如果10μ可以,50μ不行,那估计是体系大pcr效果不好,你可以都分装成10μ进行扩增。如果都不行,多半是基因组模板降解等原因。 ...

同源臂大小是2000,会不会太长

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-12-15 12:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 声线青鸟 at 2016-12-15 07:54:38
上下游引物退火温度相差比较大,会不会有影响?
...

会有影响啊,两者接近,不要差太多

发自小木虫Android客户端
8楼2016-12-15 14:02:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

声线青鸟

新虫 (小有名气)

现在只有基因片段下游同源臂有,上游的一直p不出来,各位大神有遇见过这种情况么?

发自小木虫IOS客户端
9楼2016-12-15 14:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 声线青鸟 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:36 by zahslv263y
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:21 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:06 by zahslv263y
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:21 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:21 by ovidyohpyz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-02 10:06 by ovidyohpyz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-02 09:21 by dz7y1p1i98
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[论文投稿] 一篇MDPI论文改变了学习工作和生活 +3 helsinglee 2026-04-29 4/200 2026-05-01 11:45 by bobvan
[有机交流] 一个化合物的合成路线:CAS:367929-02-0 名称:8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[文学芳草园] 太白金星有点烦 +3 yexuqing 2026-04-27 3/150 2026-04-30 21:56 by myrtle
[考博] 中国地质大学(北京)博士招生补录,数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
[基金申请] 收到国自然专家邀请后几年才会有本子送过来评 +3 barley5 2026-04-30 3/150 2026-04-30 14:58 by aspect3000
[考博] 考博 +3 Eternitf 2026-04-29 3/150 2026-04-30 07:17 by 13811244083
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的,纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
[论文投稿] 有人投过CCC中国控制会议吗? 19+3 初九凡 2026-04-26 3/150 2026-04-27 08:58 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见