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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 涂板子问题！
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

[求助] 涂板子问题！ 已有10人参与

重组子转化大肠杆菌以后，进行涂板子，为什么做了好几次我的板子上的菌只长出了一两个！是什么问题？？？请各位师兄师姐赐教！
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1楼 2016-11-17 08:10:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mailmrcai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-19 22:29:14
转化效率低，无非就是两个原因了，连接效率低，感受态效率低。只长一两个如果是阳性克隆也够用啊，最终只用得着一个。如果只是想多一些斑，LB孵育久一点就是了。
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Comeon！
19楼2016-11-19 18:51:15
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664751146

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-23 20:26:59
可能是DNA浓度太高了 ，之前我们也是 感受态、连接都没问题，怎么也长不出来，后来把DNA上样量从2.5改到了0.25—0.5ul 现在长得很好。
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18楼2016-11-19 09:41:10
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
对的有一个就够了，错的一万个也没用。

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26楼2016-11-24 01:49:07
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:51:11
引用回帖:
4楼: Originally posted by 上官凤舞 at 2016-11-17 08:47:51
质粒浓度太低？转化时间过短？抗生素浓度过高？

应该是质粒浓度太低，我准备重新摇一下转化后的大肠杆菌，大概得多长时间就摇好了？？谢谢
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默默搜寻
5楼2016-11-17 08:51:22
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:51:17
质粒加够的话，可能你转化的时候出问题了~还有就是，既然长了点你就你鉴定一下就好了吧，对的你就继续往下做，管他多少呢
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···
6楼2016-11-17 09:24:23
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by MIDNA at 2016-11-17 11:41:36
是连接以后的表达载体质粒浓度太低，做了好几次还是太低！...

连接之后提质粒浓度太低吗？会不会你的质粒是低拷贝质粒

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···
10楼2016-11-17 11:55:51
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EthanLeePhD

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以涂前先加培养基摇几个小时在涂
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11楼2016-11-17 12:40:26
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18721317208

新虫 (初入文坛)
可能回收的问题，洗的时候可能没有洗干净，或是回收产物浓度太低，烘干的时候烘箱温度不要超过60度。转化可以调整一下，感受态细胞多加点，50_100ul，热激时间降到40s

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16楼2016-11-19 08:05:15
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古左

铜虫 (初入文坛)
只要鉴定出正确就可以

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20楼2016-11-19 19:11:05
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W生物化工

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by MIDNA at 2016-11-17 09:38:35
应该是质粒浓度太低，我想重新摇一下！大概需要多长时间？？...

我们一般过夜摇16h
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22楼2016-11-21 20:58:00
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yakun123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 664751146 at 2016-11-19 09:41:10
可能是DNA浓度太高了 ，之前我们也是 感受态、连接都没问题，怎么也长不出来，后来把DNA上样量从2.5改到了0.25—0.5ul 现在长得很好。

DNA上样量指的是质粒的转化量吗？新手请教
我师兄说质粒很好做电转，浓度在50-200之间的，只要加1微升就行，你说的0.25不会太少吗

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25楼2016-11-24 01:25:18
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15272791472

新虫 (初入文坛)
有可能是感受态细胞的问题，也有可能是质粒浓度太低，还有就是可能冰浴时间过短或过长
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27楼2016-11-27 20:00:53
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lhlhkla

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有一个是对的，总比满版都不是对的好
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明媚角落
28楼2016-12-02 09:27:36
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普通回帖

xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:50:44
xn8008: 应助指数+1 2016-11-17 11:51:03
换个感受态细胞试试，有可能是转化用的感受态细胞活性太低了
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2楼2016-11-17 08:22:13
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:50:51
引用回帖:
2楼: Originally posted by xrxleisure at 2016-11-17 08:22:13
换个感受态细胞试试，有可能是转化用的感受态细胞活性太低了

感受态应该没有问题，别人用的同一个感受态长出了好多菌落！
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3楼2016-11-17 08:29:30
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上官凤舞

新虫 (正式写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:50:58
质粒浓度太低？转化时间过短？抗生素浓度过高？

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4楼2016-11-17 08:47:51
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-17 11:51:28
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-17 09:24:23
质粒加够的话，可能你转化的时候出问题了~还有就是，既然长了点你就你鉴定一下就好了吧，对的你就继续往下做，管他多少呢

应该是质粒浓度太低，我想重新摇一下！大概需要多长时间？？
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7楼2016-11-17 09:38:35
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by MIDNA at 2016-11-17 09:38:35
应该是质粒浓度太低，我想重新摇一下！大概需要多长时间？？...

质粒浓度太低的话，不是应该重新做转化吗？
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8楼2016-11-17 09:49:08
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-17 09:49:08
质粒浓度太低的话，不是应该重新做转化吗？...

是连接以后的表达载体质粒浓度太低，做了好几次还是太低！
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9楼2016-11-17 11:41:36
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