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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 涂板子问题！
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月夜听雨0323

新虫 (初入文坛)
1.测一下菌的效价是否可以达到10^7  2.一般带有重组子的大肠杆菌生长会较慢，可以适当延长生长时间，挑菌时候挑小的单克隆  3.模板浓度和感受态配比不适合
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31楼2016-12-28 13:52:23
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感受态效率问题，参考分子克隆，制备超级感受态，质粒浓度再低也能转化出来
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32楼2016-12-28 20:48:29
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diaomou

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

原因很多，如果没烫死，往往是感受态细胞不行。
买来的未必好，因为在厂家的-80度放久了，转化率会下降。还是自己做最好。
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33楼2016-12-29 17:04:04
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

转化，一部分是看你做的连接是否有问题，其次是操作注意细节，连接推荐用一步克隆，操作细节在于自己注意了。
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34楼2017-01-06 15:27:33
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王方平

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果是自己做连接和转化，那么最好是控制一下DNA与Vector的混合比例以及连接酶的使用量。然后就看感受态的效率以及后面的孵育了，这种情况下建议孵育时间加长，孵育后将培养物低速离心后弃去部分上清，剩余培养物混匀后涂板。
希望对你有帮助
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35楼2017-02-01 16:22:49
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