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fxy0570

金虫 (正式写手)

[求助] 求助请教关天PET22B基因翻译问题,我有个基因想插入到PET22B中,关于序列*问题 已有2人参与

关于 PET22B基因翻译问题,我有个基因想插入到PET22B中,使用NdeI t和XhoI,,我的基因前面的酶切位点是NdeI ,后面是 XhoI,我看PET22B中的NdeI t和XhoI,分别是288和158,这样会不会读反啊,可是设计的时候就是这样设计的?还有直接表达没有ATG我怎么插入目的基因?
之前我做的是使用 PET22B本身的信号肽pelb,发现蛋白分子量变大了,目的蛋白大小为19KD,现有21KD,估计是pelb也一起表达了,现在想pelb是不是要去掉不要使用信号,那么去掉的话目的蛋白没有ATG,那怎么表达呢?
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fxy0570

金虫 (正式写手)

在线等待,有人吗?
4楼2016-11-16 11:03:06
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看的是反的载体,要看表达先看启动子的方向,再来看怎么插入基因

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-11-16 10:48:59
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fxy0570

金虫 (正式写手)


送红花一朵
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-23 20:17:23
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2016-11-16 10:48:59
你看的是反的载体,要看表达先看启动子的方向,再来看怎么插入基因

pet22b载体图谱中标志性序列: T7启动子:361-377 T7转录起始位点:360 pelB信号肽编码序列:224-289 多克隆位点:158-225 His标签编码序列:140-157 T7终止子:26-72 ,意思反相是从361--377往回读的吗?
3楼2016-11-16 10:58:15
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fxy0570

金虫 (正式写手)

序列已经明白了,怎么把没有起始密码子的基因插入载体中呢?怎么表达呢?
5楼2016-11-16 11:16:25
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