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fxy0570

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[求助] 求助请教关天PET22B基因翻译问题，我有个基因想插入到PET22B中，关于序列*问题已有2人参与

关于 PET22B基因翻译问题，我有个基因想插入到PET22B中，使用NdeI t和XhoI,，我的基因前面的酶切位点是NdeI ，后面是 XhoI，我看PET22B中的NdeI t和XhoI,分别是288和158，这样会不会读反啊，可是设计的时候就是这样设计的？还有直接表达没有ATG我怎么插入目的基因?
之前我做的是使用 PET22B本身的信号肽pelb，发现蛋白分子量变大了，目的蛋白大小为19KD，现有21KD,估计是pelb也一起表达了，现在想pelb是不是要去掉不要使用信号，那么去掉的话目的蛋白没有ATG，那怎么表达呢？

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1楼 2016-11-16 10:36:39

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小冀-

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-19 22:28:20

双酶切连接在设计引物的时候应该考虑正反的，如果反了而你又没有加自身启动子，那肯定是表达不了的

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···

9楼2016-11-16 22:09:55

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ztt2015

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引用回帖:

1楼: Originally posted by fxy0570 at 2016-11-16 10:36:39
关于 PET22B基因翻译问题，我有个基因想插入到PET22B中，使用NdeI t和XhoI,，我的基因前面的酶切位点是NdeI ，后面是 XhoI，我看PET22B中的NdeI t和XhoI,分别是288和158，这样会不会读反啊，可是设计的时候就是这样 ...

目标蛋白前加TEV酶酶切位点，蛋白纯化后用酶把前面的切掉就可以了。

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11楼2016-11-19 20:17:44

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