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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助请教关天PET22B基因翻译问题，我有个基因想插入到PET22B中，关于序列*问题
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ztt2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by fxy0570 at 2016-11-16 10:36:39
关于 PET22B基因翻译问题，我有个基因想插入到PET22B中，使用NdeI t和XhoI,，我的基因前面的酶切位点是NdeI ，后面是 XhoI，我看PET22B中的NdeI t和XhoI,分别是288和158，这样会不会读反啊，可是设计的时候就是这样 ...

目标蛋白前加TEV酶酶切位点，蛋白纯化后用酶把前面的切掉就可以了。

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11楼2016-11-19 20:17:44
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
不加信号肽蛋白大部分都在胞内   如果可以不分泌那么直接用pet其他系列载体

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12楼2016-11-20 18:40:56
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fxy0570 at 2016-11-17 11:13:01
不是这个问题，问题是蛋白上不能有甲硫氨基酸...

你可以用融合表达然后再切掉吧

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学习中
13楼2016-11-22 00:26:21
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fxy0570

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-11-22 00:26:21
你可以用融合表达然后再切掉吧
...

是的，要么重新加信号肽，要么加融合蛋白
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14楼2016-11-22 10:07:15
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