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小李纸11银虫 (正式写手)
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酵母电转效率低 已有2人参与
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| 重组质粒线性化后电击转化毕赤酵母，2100V，200欧，25微F，转化后涂YPSD（博莱霉素抗性）平板，第一次长了两个菌落，第二次一个都没长，整体转化效率极低，请问什么原因呢？ |
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2楼2016-11-14 16:15:22
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3楼2016-11-14 17:32:56
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嗯嗯，感受态是现做的，博莱霉素浓度100微克每毫升。。。不知道是什么问题。感受态制备步骤如下： (1) 感受态的制备： a) 挑取酵母受体菌的单菌落接种于 10mLYPD 培养基中，30℃摇床过夜。 b) 以 1 %接种量转接 100mLYPD 液体培养基，30℃摇床过夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃离心 5000rpm,5min,弃上清。 d) 用 100mL 冰预冷无均水将菌体重悬。 e) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。 f) 用 50mL 冰预冷无均水将菌体重悬。 g) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗涤 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰预冷的山梨醇，以备转化 |
4楼2016-11-14 19:02:54
小李纸11
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哦哦，感受态是这么做的： a) 挑取酵母受体菌的单菌落接种于 10mLYPD 培养基中，30℃摇床过夜。 b) 以 1 %接种量转接 100mLYPD 液体培养基，30℃摇床过夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃离心 5000rpm,5min,弃上清。 d) 用 100mL 冰预冷无均水将菌体重悬。 e) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。 f) 用 50mL 冰预冷无均水将菌体重悬。 g) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗涤 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰预冷的山梨醇，以备转化 |
5楼2016-11-14 19:04:36
6楼2016-11-15 09:35:12
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