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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酵母电转效率低
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 酵母电转效率低 已有2人参与

重组质粒线性化后电击转化毕赤酵母，2100V，200欧，25微F，转化后涂YPSD（博莱霉素抗性）平板，第一次长了两个菌落，第二次一个都没长，整体转化效率极低，请问什么原因呢？
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1楼 2016-11-14 13:12:36
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云水栖心

金虫 (小有名气)
我的毕业实验的一部分和你一样，只是长得超级多。你的博莱霉素抗性浓度是多少啊？感受态是现制的吗？

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2楼2016-11-14 16:15:22
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是感受太的问题啊~电转之后加复苏液要快

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···
3楼2016-11-14 17:32:56
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小李纸11

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云水栖心 at 2016-11-14 16:15:22
我的毕业实验的一部分和你一样，只是长得超级多。你的博莱霉素抗性浓度是多少啊？感受态是现制的吗？

嗯嗯，感受态是现做的，博莱霉素浓度100微克每毫升。。。不知道是什么问题。感受态制备步骤如下：
(1) 感受态的制备：
a) 挑取酵母受体菌的单菌落接种于 10mLYPD 培养基中，30℃摇床过夜。
b) 以 1 %接种量转接 100mLYPD 液体培养基，30℃摇床过夜至 OD=1.3-1.5。
c) 4℃离心 5000rpm,5min,弃上清。
d) 用 100mL 冰预冷无均水将菌体重悬。
e) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。
f) 用 50mL 冰预冷无均水将菌体重悬。
g) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。
h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗涤 1 次
i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰预冷的山梨醇，以备转化
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4楼2016-11-14 19:02:54
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小李纸11

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-14 17:32:56
是不是感受太的问题啊~电转之后加复苏液要快

哦哦，感受态是这么做的：
a) 挑取酵母受体菌的单菌落接种于 10mLYPD 培养基中，30℃摇床过夜。
b) 以 1 %接种量转接 100mLYPD 液体培养基，30℃摇床过夜至 OD=1.3-1.5。
c) 4℃离心 5000rpm,5min,弃上清。
d) 用 100mL 冰预冷无均水将菌体重悬。
e) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。
f) 用 50mL 冰预冷无均水将菌体重悬。
g) 4℃离心 5000rpm,10min,弃上清。
h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗涤 1 次
i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰预冷的山梨醇，以备转化
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5楼2016-11-14 19:04:36
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仁者无敌2013

木虫 (小有名气)
你在哪呢  能否赠送点载体质粒  最近做实验发现本实验室保存的空载体不好用了
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6楼2016-11-15 09:35:12
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云水栖心

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化后，需要30℃静置培养两小时后离心平铺。你的一个板铺多少微升的菌液？

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7楼2016-11-16 09:10:34
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佳敏佳敏

新虫 (初入文坛)
浓度不够 实验操作不对 挨个检查试试

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8楼2016-11-16 09:14:18
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
电压有点高，1800V效果比较好，我以前都用这个电压。那两个长出来的很可能表达会很好

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9楼2016-11-18 19:15:29
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