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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE凝胶凝固不好啦
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xingwei9830

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶凝固不好啦

我按照分子克隆的配方配了12%的丙烯酰胺凝胶（略有改动：分离胶加了4%的甘油，据说可以减少电内渗），但是浓缩胶和分离胶均凝固不好。尤其是浓缩胶凝固效果更差。然后，我重新配了所有的试剂，也换了新的TEMED,任然凝固不好。放在37度培养箱中也是如此。可是我以前配15%的胶时，凝固效果很好。不知道现在问题出在哪儿，好郁闷啊！请求各位大侠给予解答。
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1楼 2008-12-02 11:46:06
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030070316

金虫 (小有名气)
凝固跟过硫酸铵（APS)有关吧，在37度放久点看看。
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2楼2008-12-02 16:16:00
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hnanxxl

金虫 (正式写手)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-18 14:45
丙烯酰胺凝胶的凝固有两种方法：光聚合（采用核黄素）和化学聚合（过硫酸铵），不过为了操作方便，分离胶和浓缩胶均可采用化学聚合。配制凝胶溶液过程中，每加入一种溶液都有快速、充分的混匀，这样才能保证反应充分，才能得到好的凝聚效果。我不知道加入甘油有何用处，我从来没使用过，但分离效果非常好。正如2楼所言，如果用过硫酸铵聚合，最好现用现配（也可先配制成浓度较大的贮存液，这样可存放一定时间），否则直接影响聚合效果。
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3楼2008-12-02 22:02:10
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sxxuan

金虫 (著名写手)
AP最好现配现用吧
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你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2008-12-02 22:35:32
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
AP 出问题了，药品时间长了，受热易分解
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帮助虫友，提升自己
5楼2008-12-05 04:44:45
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bbyu007

木虫 (正式写手)
AP现配现用。两种胶的分界面要用水先压一层，防止分离胶被空气氧化。
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我是笨笨鱼~~~
6楼2008-12-05 09:22:01
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xingwei9830

新虫 (初入文坛)
谢谢啦！问题已解决。是AP的问题
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7楼2009-03-18 14:34:44
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544534326

至尊木虫 (著名写手)
我的浓缩胶凝固不太好，总有较多水分
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人活着就要保持一种劳作的状态！
8楼2009-05-22 19:31:26
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
我一般配好分离胶后，加一层异丙醇，可以取到消泡、压平胶面的作用，37度20min后有水清洗再倒积层胶。
另外丙烯酰胺和过硫酸铵经常换新的，短期不用放置4度冰箱保存。
TEMED量加大点试试，我用的是千分之一的用量。

[ Last edited by susizheng on 2009-5-22 at 22:45 ]
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Thank-you，so-blue.
9楼2009-05-22 22:42:07
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
过硫酸铵先用现配，teme多加点。
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10楼2009-05-22 23:26:04
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