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汕头大学海洋科学接受调剂
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xingwei9830

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶凝固不好啦

我按照分子克隆的配方配了12%的丙烯酰胺凝胶(略有改动:分离胶加了4%的甘油,据说可以减少电内渗),但是浓缩胶和分离胶均凝固不好。尤其是浓缩胶凝固效果更差。然后,我重新配了所有的试剂,也换了新的TEMED,任然凝固不好。放在37度培养箱中也是如此。可是我以前配15%的胶时,凝固效果很好。不知道现在问题出在哪儿,好郁闷啊!请求各位大侠给予解答。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

我一般配好分离胶后,加一层异丙醇,可以取到消泡、压平胶面的作用,37度20min后有水清洗再倒积层胶。
另外丙烯酰胺和过硫酸铵经常换新的,短期不用放置4度冰箱保存。
TEMED量加大点试试,我用的是千分之一的用量。

[ Last edited by susizheng on 2009-5-22 at 22:45 ]
Thank-you,so-blue.
9楼2009-05-22 22:42:07
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查看全部 12 个回答

030070316

金虫 (小有名气)

凝固跟过硫酸铵(APS)有关吧,在37度放久点看看。
2楼2008-12-02 16:16:00
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hnanxxl

金虫 (正式写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-18 14:45
丙烯酰胺凝胶的凝固有两种方法:光聚合(采用核黄素)和化学聚合(过硫酸铵),不过为了操作方便,分离胶和浓缩胶均可采用化学聚合。配制凝胶溶液过程中,每加入一种溶液都有快速、充分的混匀,这样才能保证反应充分,才能得到好的凝聚效果。我不知道加入甘油有何用处,我从来没使用过,但分离效果非常好。正如2楼所言,如果用过硫酸铵聚合,最好现用现配(也可先配制成浓度较大的贮存液,这样可存放一定时间),否则直接影响聚合效果。
3楼2008-12-02 22:02:10
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sxxuan

金虫 (著名写手)

AP最好现配现用吧
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2008-12-02 22:35:32
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