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山脚下的喵

新虫 (小有名气)


[交流] 酵母+载体构建

大家好,我想构建一个载体,需要把质粒和载体片段一起导入到酵母里,让它们在酵母里连成一个片段。能在体外做这个连接反应么,会不会效率比较低呢。做酵母感受态有点复杂呀,哈哈。
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子龙

禁虫 (职业作家)

★
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

6楼2016-11-14 09:24:58
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tableman

木虫之王 (文学泰斗)


★
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主了。
8楼2016-11-14 09:54:56
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star013

新虫 (知名作家)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们可以提供该技术服务呃

发自小木虫Android客户端
12楼2016-11-17 13:15:25
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shanliwademen

木虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by star013 at 2016-11-17 13:15:25
我们可以提供该技术服务呃

有酵母系统质粒吗

发自小木虫Android客户端
13楼2016-11-17 15:17:31
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star013

新虫 (知名作家)


14楼2016-11-17 15:18:01
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用穿梭质粒,先构建好后转化大肠,验证后提取质粒,化学法或电转化酵母

发自小木虫IOS客户端
16楼2016-11-18 17:15:48
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)


引用回帖:
16楼: Originally posted by xtcao668 at 2016-11-18 17:15:48
用穿梭质粒,先构建好后转化大肠,验证后提取质粒,化学法或电转化酵母

你好,我有一个片段想要连接到质粒上,片段两端有与质粒同源的10bp左右的片段,请问可以把酶切后的质粒与这个片段一起转化大肠杆菌么。之前一直是先转化酵母,再从酵母里提出质粒,再转化大肠杆菌的。是说在酵母里连接的效果比较好么?非常感谢~~
17楼2016-11-19 18:07:03
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
10bp有点短,最好45bp

发自小木虫IOS客户端
18楼2016-11-19 22:33:40
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)


GIBSON 重组就很容易,不过10bp有点短

发自小木虫Android客户端
19楼2016-11-20 23:46:11
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)


也可以重新设计引物扩增,加入酶切位点做啊

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20楼2016-11-20 23:46:25
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)


引用回帖:
18楼: Originally posted by xtcao668 at 2016-11-19 22:33:40
10bp有点短,最好45bp

非常感谢~~我记错了,今天看了一下,是37bp,请问这样是否可以直接转大肠杆菌试一下呢?
21楼2016-11-21 20:24:53
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痞子无敌

金虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用一步克隆吧…

发自小木虫IOS客户端
22楼2016-11-21 20:37:51
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)


引用回帖:
19楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-11-20 23:46:11
GIBSON 重组就很容易,不过10bp有点短

请问GIBSON重组是什么原理呢,是否要建立新的体系呢?谢谢~~
23楼2016-11-21 20:43:36
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by 山脚下的喵 at 2016-11-21 20:43:36
请问GIBSON重组是什么原理呢,是否要建立新的体系呢?谢谢~~...

全式金有试剂盒的,你可以到他们网站上下载说明书看看

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24楼2016-11-22 00:23:47
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514278815

木虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感受态很简单,你是懒

发自小木虫Android客户端
25楼2016-11-22 08:32:20
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)


引用回帖:
25楼: Originally posted by 514278815 at 2016-11-22 08:32:20
感受态很简单,你是懒

真相了,麻烦耗时,而且酵母中的连接效果并不太理想。最主要是不明白,大肠杆菌能做的事,为啥要整到酵母里呢。
26楼2016-11-23 19:44:32
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简单回复
2016-11-14 08:50   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
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otijju3楼
2016-11-14 09:00   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
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2016-11-14 09:05   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
dsctg5楼
2016-11-14 09:18   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
2016-11-14 09:47   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
youngen9楼
2016-11-17 06:16   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
shenrenren10楼
2016-11-17 06:17   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
tzynew11楼
2016-11-17 07:02   回复  
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
2016-11-17 15:41   回复  
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