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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母+载体构建
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母+载体构建

大家好，我想构建一个载体，需要把质粒和载体片段一起导入到酵母里，让它们在酵母里连成一个片段。能在体外做这个连接反应么，会不会效率比较低呢。做酵母感受态有点复杂呀，哈哈。
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1楼 2016-11-14 08:39:24
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子龙

禁虫 (职业作家)
★
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
6楼2016-11-14 09:24:58
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tableman

木虫之王 (文学泰斗)
★
山脚下的喵(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主了。
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8楼2016-11-14 09:54:56
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star013

新虫 (知名作家)
★
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我们可以提供该技术服务呃

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12楼2016-11-17 13:15:25
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shanliwademen

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by star013 at 2016-11-17 13:15:25
我们可以提供该技术服务呃

有酵母系统质粒吗

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13楼2016-11-17 15:17:31
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star013

新虫 (知名作家)
有的

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14楼2016-11-17 15:18:01
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用穿梭质粒，先构建好后转化大肠，验证后提取质粒，化学法或电转化酵母

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16楼2016-11-18 17:15:48
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by xtcao668 at 2016-11-18 17:15:48
用穿梭质粒，先构建好后转化大肠，验证后提取质粒，化学法或电转化酵母

你好，我有一个片段想要连接到质粒上，片段两端有与质粒同源的10bp左右的片段，请问可以把酶切后的质粒与这个片段一起转化大肠杆菌么。之前一直是先转化酵母，再从酵母里提出质粒，再转化大肠杆菌的。是说在酵母里连接的效果比较好么？非常感谢~~
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17楼2016-11-19 18:07:03
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
10bp有点短，最好45bp

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18楼2016-11-19 22:33:40
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
GIBSON 重组就很容易，不过10bp有点短

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19楼2016-11-20 23:46:11
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
也可以重新设计引物扩增，加入酶切位点做啊

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20楼2016-11-20 23:46:25
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by xtcao668 at 2016-11-19 22:33:40
10bp有点短，最好45bp

非常感谢~~我记错了，今天看了一下，是37bp，请问这样是否可以直接转大肠杆菌试一下呢？
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21楼2016-11-21 20:24:53
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用一步克隆吧…

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22楼2016-11-21 20:37:51
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-11-20 23:46:11
GIBSON 重组就很容易，不过10bp有点短

请问GIBSON重组是什么原理呢，是否要建立新的体系呢？谢谢~~
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23楼2016-11-21 20:43:36
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by 山脚下的喵 at 2016-11-21 20:43:36
请问GIBSON重组是什么原理呢，是否要建立新的体系呢？谢谢~~...

全式金有试剂盒的，你可以到他们网站上下载说明书看看

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24楼2016-11-22 00:23:47
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514278815

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感受态很简单，你是懒

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25楼2016-11-22 08:32:20
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山脚下的喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 514278815 at 2016-11-22 08:32:20
感受态很简单，你是懒

真相了，麻烦耗时，而且酵母中的连接效果并不太理想。最主要是不明白，大肠杆菌能做的事，为啥要整到酵母里呢。
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26楼2016-11-23 19:44:32
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浅语若水2楼
2016-11-14 08:50   回复  
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otijju3楼
2016-11-14 09:00   回复  
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超级老快4楼
2016-11-14 09:05   回复  
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dsctg5楼
2016-11-14 09:18   回复  
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caledonian7楼
2016-11-14 09:47   回复  
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youngen9楼
2016-11-17 06:16   回复  
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shenrenren10楼
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tzynew11楼
2016-11-17 07:02   回复  
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也许太固执15楼
2016-11-17 15:41   回复  
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