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然然家的

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因载体 已有2人参与

基因与载体连接转化后涂平板,然后挑菌pcr,跑核酸胶一直没有条带,没有连接成功哪里出错啦,求解!!!
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-29 11:30:17
是不是菌太浓了?我也遇到过菌液PCR没有条带,但是提质粒、酶切鉴定,是对的这种情况。
2楼2016-10-28 22:36:48
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然然家的

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-29 11:30:23
我是挑的菌,用10微升混匀,然后用1微升PCR的,不太可能是菌浓度大吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2016-10-29 08:23:32
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010308Jing

木虫 (正式写手)

会不会就是假阳性克隆啊?载体本身就没有连上呢

发自小木虫Android客户端
4楼2016-10-29 15:08:51
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

5楼2016-10-31 08:39:51
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pcr,酶切,转化,都有可能出问题

发自小木虫Android客户端
···
6楼2016-10-31 08:42:55
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然然家的

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-10-29 15:08:51
会不会就是假阳性克隆啊?载体本身就没有连上呢

我用剩下的菌液摇床,然后提质粒,pcr,跑胶,有微弱的条带,是不是连接率比较低呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-10-31 09:34:49
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qhiv6

新虫 (小有名气)

试一下酶切,提质粒尽量浓度大一些然后酶切跑电泳

发自小木虫Android客户端
8楼2016-11-02 13:54:47
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