[交流] NCBI还能设计q-PCR引物？！是的！ 已有2人参与

今天有小伙伴问小编怎么设计q-PCR的引物？于是乎，就有了这个热喷喷的帖子了，大家快来，干货拿走！平时大家都用AlleID6.0来设计引物，但是有时候会因为电脑系统不兼容的问题而没法设计引物。所以用这种方法来弥补这个缺点。第一步当然是进入NCBI主页了哦，选择基因，现在以ct2这个基因为例给大家讲解。 下一步，选择第一个有关拟南芥的基因进去如下界面： 我们选择NM_106232.3，NM的含义是Number of mRNA，之后点击进去： 看到在界面的左侧有个Analyze this sequence下面有个Pick primers的选项卡，点击进去： 在框里会自动生成mRNA的序列号或者手动粘贴序列，调节产物大小值（qPCR一般在100-200之间），退火温度等等。在下面Exon/intron selection选项里，一般选择no proference,第二个选项Primer must span an exon-exon junction的意思是产物跨越两个外显子，第三个意思是产物不跨外显子。 点击get primer： 上面红色的一段就是DNA序列，下面黑色一段一段的是外显子，蓝色的就是pcr产物了，根据自己的需求就可以选择相应的引物了。总之当用软件无法满足自己的需求时，可以选择这种方法来设计引物。祝大家实验顺利！ 本文转载自川农CNS阅读吧，作者ID：请叫我何博

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