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存世孤品

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化求助 已有4人参与

原核表达带组氨酸标签的蛋白没办法挂镍柱纯化，蛋白在包涵体，大小70KD左右，请问有什么别的可行方法吗？

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1楼 2016-10-26 10:53:34
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
4MOL,8MOL尿素变性，在用60KD的透析袋复性，看看能不能纯化。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2016-10-26 10:58:59
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awaken2013

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 存世孤品 at 2016-10-28 23:56:49
请问能具体一点吗？什么还原剂以及用法用量？如果能挂上感激不尽！
...

还原剂*
5 mM DTE
5 mM DTT
20 mMβ－巯基乙醇
5 mM TCEP
10 mM 还原型谷胱甘肽
都是兼容的（GE的柱子）具体使用浓度看你自己的型号和具体实验操作。
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11楼2016-10-29 15:11:43
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普通回帖

存世孤品

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-10-26 10:58:59
4MOL,8MOL尿素变性，在用60KD的透析袋复性，看看能不能纯化。

蛋白已经溶在8M脲里面了啊

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3楼2016-10-26 23:37:38
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kevinlau1990

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 19:39:28
首先确定一下需要纯化的蛋白是否有问题，因为你的描述不够清楚。其次检查柱子的效力是否还在。不能挂柱的原因是多种多样的，要一一寻找原因。
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4楼2016-10-27 08:46:54
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存世孤品

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kevinlau1990 at 2016-10-27 08:46:54
首先确定一下需要纯化的蛋白是否有问题，因为你的描述不够清楚。其次检查柱子的效力是否还在。不能挂柱的原因是多种多样的，要一一寻找原因。

蛋白经过wb检测和elisa检测都是阳性，镍柱也是新的，组氨酸标签氮端和碳端都做了，就是挂不上。。

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5楼2016-10-27 22:14:51
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做蛋白纯化

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6楼2016-10-28 10:21:26
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awaken2013

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 存世孤品 at 2016-10-26 23:37:38
蛋白已经溶在8M脲里面了啊
...

再加点还原剂打开二硫键 效果会更好
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7楼2016-10-28 20:19:06
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存世孤品

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by awaken2013 at 2016-10-28 20:19:06
再加点还原剂打开二硫键 效果会更好...

请问能具体一点吗？什么还原剂以及用法用量？如果能挂上感激不尽！

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8楼2016-10-28 23:56:49
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存世孤品

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by star013 at 2016-10-28 10:21:26
我们可以做蛋白纯化

怎么做

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9楼2016-10-28 23:57:21
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
10楼2016-10-29 09:52:17
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