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新人求帮助

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化之后菌落pcr鉴定 已有1人参与

重组质粒转化大肠杆菌DE3后,用菌落pcr鉴定,引物是通用引物,挑了20个单菌落,结果全是假阳性,求解??

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mmsmzcrjxh

新虫 (初入文坛)

设置对照组了嘛?阳性对照:重组质粒;阴性对照:空菌DE3。扩增结果怎么样?

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2楼2016-10-26 10:14:08
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月夜听雨0323

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
话说你载体是双酶切线性化还是PCR方法线性化的?首先,假阳性,是没有条带,还是测序后序列不对?如果是空载,那可能是背景比较高,造成背景高的原因,可能是双酶切没有跑胶回收,或者PCR线性化方式没有用Dpn1消化环状DNA,或者你可以试试诺唯赞的重组酶,主要是做不出来有售后服务可以解决问题……
3楼2016-10-27 16:10:21
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