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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化之后菌落pcr鉴定
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新人求帮助

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化之后菌落pcr鉴定 已有1人参与

重组质粒转化大肠杆菌DE3后，用菌落pcr鉴定，引物是通用引物，挑了20个单菌落，结果全是假阳性，求解？？

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1楼 2016-10-25 14:06:39
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mmsmzcrjxh

新虫 (初入文坛)
设置对照组了嘛？阳性对照：重组质粒；阴性对照：空菌DE3。扩增结果怎么样？

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2楼2016-10-26 10:14:08
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月夜听雨0323

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
话说你载体是双酶切线性化还是PCR方法线性化的？首先，假阳性，是没有条带，还是测序后序列不对？如果是空载，那可能是背景比较高，造成背景高的原因，可能是双酶切没有跑胶回收，或者PCR线性化方式没有用Dpn1消化环状DNA，或者你可以试试诺唯赞的重组酶，主要是做不出来有售后服务可以解决问题……
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3楼2016-10-27 16:10:21
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