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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化后摇菌提质粒酶切没结果
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后摇菌提质粒酶切没结果 已有1人参与

从转化后的平板上挑单菌落摇菌，做菌液PCR结果是对的，然而接种过夜摇了以后提质粒后酶切就切不来了是什么原因呀？大神们，救救我，又死在这一步了，呜呜呜呜………………

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1楼 2016-10-23 17:16:42
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，确定你的单菌落是阳性，既然做了菌液PCR，大小确定是对的，不妨顺便做个测序，建议用通用引物测序，确定目标片段两侧的酶切位点的准确性。
如果确定了序列和酶切位点准确了，那就可能是酶切的问题了，双酶切的话效率会有所降低，选用合适的buffer，适当延长酶切时间，可以37℃切过夜试试。
还是不行的话，怀疑内切酶变质失活，换个批次或换个品牌再试试。
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Gengli0909
2楼2016-10-24 08:31:01
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Gengli0909

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2016-10-24 08:31:01
首先，确定你的单菌落是阳性，既然做了菌液PCR，大小确定是对的，不妨顺便做个测序，建议用通用引物测序，确定目标片段两侧的酶切位点的准确性。
如果确定了序列和酶切位点准确了，那就可能是酶切的问题了，双酶切 ...

谢谢

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3楼2016-10-24 12:11:39
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