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western blot曝光问题 已有1人参与
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之前做了western blot曝光βactin，曝光时间很快，基本两分钟就能出条带，结果如图1。0.45μmPVDF膜，蛋白上样量是2.5*17，在50左右，使用5倍液，电泳95min，转膜65min。 最近在做自己的样品，条件不变，蛋白上样量75左右。actin曝不出来或需要很长时间，结果如图2（四倍液），图3（五倍液）。前后更改了上样量，最大加到150，新配了BSA封闭液，换用了新抗体，换用了0.2μmPVDF膜，结果还是很难爆。爆出来一次时间需要很长，大概20~30min，结果如图4。曝光其他蛋白也是一样，急求大神帮忙答疑解惑，不胜感激！  图1.png  图2.png  图3.png  图4.png |
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