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兔嘻熙熙

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot曝光问题已有1人参与

之前做了western blot曝光βactin,曝光时间很快,基本两分钟就能出条带,结果如图1。0.45μmPVDF膜,蛋白上样量是2.5*17,在50左右,使用5倍液,电泳95min,转膜65min。
     最近在做自己的样品,条件不变,蛋白上样量75左右。actin曝不出来或需要很长时间,结果如图2(四倍液),图3(五倍液)。前后更改了上样量,最大加到150,新配了BSA封闭液,换用了新抗体,换用了0.2μmPVDF膜,结果还是很难爆。爆出来一次时间需要很长,大概20~30min,结果如图4。曝光其他蛋白也是一样,急求大神帮忙答疑解惑,不胜感激!

western blot曝光问题
图1.png


western blot曝光问题-1
图2.png


western blot曝光问题-2
图3.png


western blot曝光问题-3
图4.png
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啦啦啦啦啦啦啦啦
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13052963280

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 兔嘻熙熙 at 2016-10-22 16:09:59
之前做了western blot曝光βactin,曝光时间很快,基本两分钟就能出条带,结果如图1。0.45μmPVDF膜,蛋白上样量是2.5*17,在50左右,使用5倍液,电泳95min,转膜65min。
     最近在做自己的样品,条件不变,蛋白 ...

楼主后来怎么解决的,我现在也遇到这种情况

发自小木虫Android客户端
2楼2018-08-13 15:23:51
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