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新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌 16S rRNA 测序 双峰 已有4人参与

用16S rRNA基因鉴定菌种,凝胶电泳有拖带现象,PCR测序结果总是正向双峰,反向正常,是什么原因,怎么破

细菌 16S rRNA  测序 双峰
W20161014.jpg
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天生我才必有用
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那山那水那人

新虫 (初入文坛)

你这初步判断是引物和模板没有结合上,你可以直接拿模板与这个PCR产物一块点样做对照看看

发自小木虫Android客户端
3楼2016-10-18 22:39:30
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那山那水那人

新虫 (初入文坛)

你这应该是2000的maker,16S一般只有1300~1500bp。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-18 22:36:25
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liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)

4楼2016-10-19 00:02:15
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runrain

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
之前好像也遇到过这种情况,我的好些是开始出现杂峰的位置有连续几个G碱基,具体可以咨询测序公司,他们比较有经验。针对这种情况,可以反向单向测通,需要设计引物,不过都可以交给测序公司做,你只要出引物合成的费用。16s单向测通的话,再设计多两个引物就能测通了。

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-10-19 09:13:38
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