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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 转染GFP细胞死了
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beanmilk

金虫 (小有名气)

[求助] 转染GFP细胞死了 已有1人参与

做了两次细胞转染EGFP，结果细胞都死了。第一次是24h在荧光下什么都看不到，第二次是48h在荧光下还能看到几个荧光点。而且第二次在刚转染后在显微镜下观察发现，有一部分是白色的雾蒙蒙的物质，然后就没管了。在这里想请教一下为嘛细胞会死？
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1楼 2016-10-18 16:09:22
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是什么方法转染的？转染试剂有毒性细胞就会死啊~  显微镜下出现白色不明物？细胞有污染？
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2楼2016-10-19 16:44:26
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你转染的质粒纯度不好，如RNA、蛋白污染严重，对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞？感觉转染效率好低。
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3楼2016-10-19 16:45:37
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你
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好好学习，天天向上
4楼2016-10-19 16:50:58
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tfytli

金虫 (职业作家)
第一，转染试剂要适量，不要加太多；第二，转染6小时记得换液；第三，提质粒的时候要小心污染，最好去内毒素

发自小木虫Android客户端
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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
5楼2016-10-20 11:17:58
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beanmilk

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-19 16:45:37
如果你转染的质粒纯度不好，如RNA、蛋白污染严重，对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞？感觉转染效率好低。

转染的是N2a细胞，是用PEI的脂质体包裹质粒转染的，白色的不明物我怀疑是脂质体，不知道是不是操作的时候没有完全振荡均匀导致的
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6楼2016-10-23 15:28:35
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beanmilk

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tfytli at 2016-10-20 11:17:58
第一，转染试剂要适量，不要加太多；第二，转染6小时记得换液；第三，提质粒的时候要小心污染，最好去内毒素

哦哦，这样啊，我一般转染后24小时才看一次
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7楼2016-10-23 15:29:15
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beanmilk

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 寂寞之巅 at 2016-10-19 16:50:58
建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你

先加了100μL的opti-MEM，然后加入4.5μL的质粒（师姐说质粒转染效率不好就多加了点），再加了4.5μL的PEI，振荡后静置了30min，再完全加入到培养的细胞中
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8楼2016-10-23 15:33:15
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