24小时热门版块排行榜    

查看: 1883  |  回复: 7

beanmilk

金虫 (小有名气)

[求助] 转染GFP细胞死了 已有1人参与

做了两次细胞转染EGFP,结果细胞都死了。第一次是24h在荧光下什么都看不到,第二次是48h在荧光下还能看到几个荧光点。而且第二次在刚转染后在显微镜下观察发现,有一部分是白色的雾蒙蒙的物质,然后就没管了。在这里想请教一下为嘛细胞会死?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是什么方法转染的?转染试剂有毒性细胞就会死啊~  显微镜下出现白色不明物?细胞有污染?
2楼2016-10-19 16:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你转染的质粒纯度不好,如RNA、蛋白污染严重,对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞?感觉转染效率好低。
3楼2016-10-19 16:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞之巅

铁虫 (小有名气)

建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你
好好学习,天天向上
4楼2016-10-19 16:50:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tfytli

金虫 (职业作家)

第一,转染试剂要适量,不要加太多;第二,转染6小时记得换液;第三,提质粒的时候要小心污染,最好去内毒素

发自小木虫Android客户端
最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道,外加一点数据。
5楼2016-10-20 11:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-19 16:45:37
如果你转染的质粒纯度不好,如RNA、蛋白污染严重,对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞?感觉转染效率好低。

转染的是N2a细胞,是用PEI的脂质体包裹质粒转染的,白色的不明物我怀疑是脂质体,不知道是不是操作的时候没有完全振荡均匀导致的
6楼2016-10-23 15:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tfytli at 2016-10-20 11:17:58
第一,转染试剂要适量,不要加太多;第二,转染6小时记得换液;第三,提质粒的时候要小心污染,最好去内毒素

哦哦,这样啊,我一般转染后24小时才看一次
7楼2016-10-23 15:29:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 寂寞之巅 at 2016-10-19 16:50:58
建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你

先加了100μL的opti-MEM,然后加入4.5μL的质粒(师姐说质粒转染效率不好就多加了点),再加了4.5μL的PEI,振荡后静置了30min,再完全加入到培养的细胞中
8楼2016-10-23 15:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 beanmilk 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 312求调剂 +5 上岸吧ZJY 2026-03-22 8/400 2026-03-26 13:12 by 公瑾逍遥
[考研] 296求调剂 +5 www_q 2026-03-20 5/250 2026-03-26 12:56 by 3Strings
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +12 RichLi_ 2026-03-25 12/600 2026-03-26 12:34 by 小小麦片
[考研] 考研调剂 +4 小蜡新笔 2026-03-26 4/200 2026-03-26 12:33 by ms629
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +6 哈哈157349 2026-03-21 6/300 2026-03-26 10:39 by 醉在风里
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
信息提示
请填处理意见