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beanmilk

金虫 (小有名气)

[求助] 转染GFP细胞死了 已有1人参与

做了两次细胞转染EGFP,结果细胞都死了。第一次是24h在荧光下什么都看不到,第二次是48h在荧光下还能看到几个荧光点。而且第二次在刚转染后在显微镜下观察发现,有一部分是白色的雾蒙蒙的物质,然后就没管了。在这里想请教一下为嘛细胞会死?
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是什么方法转染的?转染试剂有毒性细胞就会死啊~  显微镜下出现白色不明物?细胞有污染?
2楼2016-10-19 16:44:26
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你转染的质粒纯度不好,如RNA、蛋白污染严重,对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞?感觉转染效率好低。
3楼2016-10-19 16:45:37
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)

建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你
好好学习,天天向上
4楼2016-10-19 16:50:58
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tfytli

金虫 (职业作家)

第一,转染试剂要适量,不要加太多;第二,转染6小时记得换液;第三,提质粒的时候要小心污染,最好去内毒素

发自小木虫Android客户端
最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道,外加一点数据。
5楼2016-10-20 11:17:58
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beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2016-10-19 16:45:37
如果你转染的质粒纯度不好,如RNA、蛋白污染严重,对细胞的转染影响也会很大的。你转的什么细胞?感觉转染效率好低。

转染的是N2a细胞,是用PEI的脂质体包裹质粒转染的,白色的不明物我怀疑是脂质体,不知道是不是操作的时候没有完全振荡均匀导致的
6楼2016-10-23 15:28:35
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beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tfytli at 2016-10-20 11:17:58
第一,转染试剂要适量,不要加太多;第二,转染6小时记得换液;第三,提质粒的时候要小心污染,最好去内毒素

哦哦,这样啊,我一般转染后24小时才看一次
7楼2016-10-23 15:29:15
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beanmilk

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 寂寞之巅 at 2016-10-19 16:50:58
建议你将转染条件 转染细胞写清楚 这样写个标题 别人相帮也帮不了你

先加了100μL的opti-MEM,然后加入4.5μL的质粒(师姐说质粒转染效率不好就多加了点),再加了4.5μL的PEI,振荡后静置了30min,再完全加入到培养的细胞中
8楼2016-10-23 15:33:15
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