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杨永芝

银虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母破壁 已有2人参与

我用毕赤酵母CS115做表达(外源基因表达),但是每次破壁都破不了。用的是玻璃株破碎法。具体步骤:先收集细胞,用去离子水洗2两次,加入100ul的PBSbuffer,再加入等体积的玻璃株漩涡(涡旋30s,冰上放置30s,反复8次)离心收集上清,电泳。
除此之外,还用了试剂盒提取,和0.3M的氢氧化钠裂解,都没有破壁。
在配置BMMY和BMGY培养基时,里面需要磷酸钾。我先配的时候溶液是清澈的,但是灭菌后就是浑浊的。会不会有这个关系。然后,先在BMGY培养时,菌会有氨气的味道,很刺鼻。有没有谁可以解答我疑问啊?求大神指点!!!!!
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suninghao

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

现在细胞破壁都是细胞破碎机了,JNBIO,广州聚能的,物理方法,破壁效率高,可以达到98%以上,没有任何污染。
赵凯院士写的书《疫苗研究与应用》,里面就推荐这家单位的细胞破碎机
5楼2018-04-23 11:48:29
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AnfieldNeal

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
宝生物有个酵母总蛋白提取试剂,我正想试一下 你也可以尝试下
2楼2016-10-18 10:04:28
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杨永芝

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by AnfieldNeal at 2016-10-18 10:04:28
宝生物有个酵母总蛋白提取试剂,我正想试一下 你也可以尝试下

我又做了破壁。直接在YPD里面长收集菌体,用玻璃株就破出来。但是诱导过后就破不出来。不晓得是什么原因呢。你遇到过这个问题没有?你配磷酸钾缓冲液(pH=6.0)(BMGY.和BMMY需要用到的)怎么配置的呢?
3楼2016-10-19 12:54:01
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微微_jane

新虫 (初入文坛)

你好,我想问下你现在破壁成功了吗?我现在也是每次都破不好,你是用什么方法破的?
4楼2017-06-14 17:01:55
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