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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 毕赤酵母破壁
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杨永芝

银虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母破壁 已有2人参与

我用毕赤酵母CS115做表达（外源基因表达），但是每次破壁都破不了。用的是玻璃株破碎法。具体步骤：先收集细胞，用去离子水洗2两次，加入100ul的PBSbuffer，再加入等体积的玻璃株漩涡（涡旋30s，冰上放置30s，反复8次）离心收集上清，电泳。
除此之外，还用了试剂盒提取，和0.3M的氢氧化钠裂解，都没有破壁。
在配置BMMY和BMGY培养基时，里面需要磷酸钾。我先配的时候溶液是清澈的，但是灭菌后就是浑浊的。会不会有这个关系。然后，先在BMGY培养时，菌会有氨气的味道，很刺鼻。有没有谁可以解答我疑问啊？求大神指点！！！！！
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1楼 2016-10-17 10:54:00
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AnfieldNeal

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
宝生物有个酵母总蛋白提取试剂，我正想试一下 你也可以尝试下
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2楼2016-10-18 10:04:28
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杨永芝

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by AnfieldNeal at 2016-10-18 10:04:28
宝生物有个酵母总蛋白提取试剂，我正想试一下 你也可以尝试下

我又做了破壁。直接在YPD里面长收集菌体，用玻璃株就破出来。但是诱导过后就破不出来。不晓得是什么原因呢。你遇到过这个问题没有？你配磷酸钾缓冲液（pH=6.0)(BMGY.和BMMY需要用到的)怎么配置的呢？
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3楼2016-10-19 12:54:01
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微微_jane

新虫 (初入文坛)
你好，我想问下你现在破壁成功了吗？我现在也是每次都破不好，你是用什么方法破的？
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4楼2017-06-14 17:01:55
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suninghao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

现在细胞破壁都是细胞破碎机了，JNBIO，广州聚能的，物理方法，破壁效率高，可以达到98%以上，没有任何污染。
赵凯院士写的书《疫苗研究与应用》，里面就推荐这家单位的细胞破碎机
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5楼2018-04-23 11:48:29
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