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CaCl2制备stabl3感受态细胞 已有1人参与
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各位研友们，我用氯化钙溶液制备stabl3感受态细胞总会出现问题，不是转化效率不高，就是用制备的感受态细胞（没有转化任何质粒）摇菌后涂布在含有氨苄的LB培养基中长成片，总之就是制备的感受态完全不能用，换句话说做不出感受态细胞，想和各位研友们讨论一下具体步骤，看看需要这样做比较合适。 1、制备0.1M氯化钙溶液能直接用高压灭菌锅灭菌后自然冷却，再放入4℃冰箱里面预冷么？还是说只能用抽滤的方法进行除菌？ 2、挑取的单菌落在20毫升LB中37℃摇菌8小时。这一步时间会不会过长，导致杂菌生长，或者说菌浓过大？ 3、吸取2毫升菌液到100mlLB中37℃扩陪3小时。由于经过两步摇菌，会不会多次转化会有影响？ 4、50毫升菌液4℃离心后用25毫升氯化钙处理20分钟。氯化钙的体积够么？ 还有什么注意事项，麻烦各位研友和我说说，万分感谢~~~@youlinglyw |
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小冀-
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染菌的问题没人能帮你，只能说注意操作。摇瓶3个小时会不会有点长，一般大肠37度一个半小时就可以到0.6了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-10-15 09:39:13
3楼2016-10-16 21:04:37
小冀-
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【答案】应助回帖
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那样菌体量会不会太少了吧，再加上转化效率不高的话，很难获得转化子的～大肠感受态我们都是用LB培养，一个半小时左右就到0.6了，转化效率也蛮高的 发自小木虫Android客户端 |
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Quellayhy4楼2016-10-16 21:17:30
5楼2016-10-17 08:09:21
6楼2017-11-09 23:22:19