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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » CaCl2制备stabl3感受态细胞
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Quellayhy

新虫 (初入文坛)

[求助] CaCl2制备stabl3感受态细胞 已有1人参与

各位研友们，我用氯化钙溶液制备stabl3感受态细胞总会出现问题，不是转化效率不高，就是用制备的感受态细胞（没有转化任何质粒）摇菌后涂布在含有氨苄的LB培养基中长成片，总之就是制备的感受态完全不能用，换句话说做不出感受态细胞，想和各位研友们讨论一下具体步骤，看看需要这样做比较合适。
1、制备0.1M氯化钙溶液能直接用高压灭菌锅灭菌后自然冷却，再放入4℃冰箱里面预冷么？还是说只能用抽滤的方法进行除菌？
2、挑取的单菌落在20毫升LB中37℃摇菌8小时。这一步时间会不会过长，导致杂菌生长，或者说菌浓过大？
3、吸取2毫升菌液到100mlLB中37℃扩陪3小时。由于经过两步摇菌，会不会多次转化会有影响？
4、50毫升菌液4℃离心后用25毫升氯化钙处理20分钟。氯化钙的体积够么？
      还有什么注意事项，麻烦各位研友和我说说，万分感谢~~~@youlinglyw
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1楼 2016-10-14 17:15:40
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by Quellayhy at 2016-10-16 21:04:37
我们用的stabl3扩培摇菌3小时后好像没有达到0.3呀……
...

那样菌体量会不会太少了吧，再加上转化效率不高的话，很难获得转化子的～大肠感受态我们都是用LB培养，一个半小时左右就到0.6了，转化效率也蛮高的

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Quellayhy
···
4楼2016-10-16 21:17:30
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-16 22:21:28
染菌的问题没人能帮你，只能说注意操作。摇瓶3个小时会不会有点长，一般大肠37度一个半小时就可以到0.6了

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2楼2016-10-15 09:39:13
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Quellayhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-15 09:39:13
染菌的问题没人能帮你，只能说注意操作。摇瓶3个小时会不会有点长，一般大肠37度一个半小时就可以到0.6了

我们用的stabl3扩培摇菌3小时后好像没有达到0.3呀……

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3楼2016-10-16 21:04:37
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Quellayhy

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-16 21:17:30
那样菌体量会不会太少了吧，再加上转化效率不高的话，很难获得转化子的～大肠感受态我们都是用LB培养，一个半小时左右就到0.6了，转化效率也蛮高的
...

好哒好哒，我换管试试，谢谢～

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5楼2016-10-17 08:09:21
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查看全部 6 个回答
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