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策马入林

新虫 (小有名气)

[求助] 定点突变DpnI消解后转化不长点 已有1人参与

之前做了一批突变,这两天又开始再做一些,按照以前的步骤,设计引物,用质粒做模板PCR,然后跑胶看到目的条带挺明显,用DpnI消解2h,然后转化,结果没有长点,用没消解的pcr产物做转化,可以长许多点,这我就郁闷了,DpnI不是敏感消解经甲基化修饰的位点吗?谁与到过类似情况吗?或者哪位大侠可以指点一二
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

有可能是你的目的基因中带有这个没切位点,另一种可能是没有切开

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-14 10:36:12
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闲来小译

金虫 (正式写手)

酶切前后样品跑胶看看条带去哪了
3楼2016-10-15 02:23:25
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MMCCBB

新虫 (著名写手)

可以稀释模板的浓度小于8ng/ul,然后PCR直接转化挑板测序,成功率一般大于50%

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-10-15 06:46:46
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策马入林

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lemonvivi at 2016-10-14 10:36:12
有可能是你的目的基因中带有这个没切位点,另一种可能是没有切开

目的基因是带这个酶切位点的,但是正常不是应该不切这种PCR的到的没有甲基化的位点吗
5楼2016-10-17 23:03:06
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策马入林

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by MMCCBB at 2016-10-15 06:46:46
可以稀释模板的浓度小于8ng/ul,然后PCR直接转化挑板测序,成功率一般大于50%

好的,这个我试试。谢谢
6楼2016-10-17 23:03:32
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dazhi110

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

7楼2016-10-19 14:54:41
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dazhi110

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

8楼2016-10-19 14:56:20
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