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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 定点突变DpnI消解后转化不长点
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策马入林

新虫 (小有名气)

[求助] 定点突变DpnI消解后转化不长点 已有1人参与

之前做了一批突变，这两天又开始再做一些，按照以前的步骤，设计引物，用质粒做模板PCR，然后跑胶看到目的条带挺明显，用DpnI消解2h，然后转化，结果没有长点，用没消解的pcr产物做转化，可以长许多点，这我就郁闷了，DpnI不是敏感消解经甲基化修饰的位点吗？谁与到过类似情况吗？或者哪位大侠可以指点一二
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1楼 2016-10-14 10:33:48
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
有可能是你的目的基因中带有这个没切位点，另一种可能是没有切开

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-10-14 10:36:12
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闲来小译

金虫 (正式写手)
酶切前后样品跑胶看看条带去哪了
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3楼2016-10-15 02:23:25
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
可以稀释模板的浓度小于8ng/ul,然后PCR直接转化挑板测序，成功率一般大于50%

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-10-15 06:46:46
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策马入林

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lemonvivi at 2016-10-14 10:36:12
有可能是你的目的基因中带有这个没切位点，另一种可能是没有切开

目的基因是带这个酶切位点的，但是正常不是应该不切这种PCR的到的没有甲基化的位点吗
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5楼2016-10-17 23:03:06
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策马入林

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by MMCCBB at 2016-10-15 06:46:46
可以稀释模板的浓度小于8ng/ul,然后PCR直接转化挑板测序，成功率一般大于50%

好的，这个我试试。谢谢
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6楼2016-10-17 23:03:32
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dazhi110

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2016-10-19 14:54:41
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dazhi110

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2016-10-19 14:56:20
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