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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！

本人，因要做荧光定量PCR，对引物的特异性要求很高，二聚体都没有最好，

现在所P条带，除目的带外，还具有比较明显的二聚体（导致Real-Time时出现

2个峰），请教各位大侠，如何在现有引物条件下，减少甚至去除二聚体？

谢谢指教！
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
1楼 2008-11-25 23:22:15
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
我都设了好多引物啦，上游5条，下游5条呢，。结果还是没有满意的啊
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
7楼2008-11-27 21:35:29
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lipishun

金虫 (小有名气)
你设计的引物很特异？
提高退火温度，或者直接用两步法
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2楼2008-11-26 00:06:41
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
是的，只有一条带，但二聚体明显，温度已由55提到了57，还是没有什么改善，

请问两步法是何意？能否讲详细点，谢谢。
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
3楼2008-11-26 11:24:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
nandaxq(金币+1,VIP+0):这个估计很难啊，57要跳到72行不通的吧。
就是退火和延伸用同个温度，就是说，退火温度要很高
试试热启动酶，能够很大程度上消除dimer的
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2008-11-26 16:35:14
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